本实验用PCR的方法得到RV VP4的抗原表位核苷酸序列,并人工合成了RV VP7的三个抗原表位核苷酸序列、通用辅助性T淋巴细胞表位(PADRE)核苷酸序列和编码破伤风毒素上T细胞激活位点[1,2]的核苷酸序列,各表位间以非极性的甘氨酸和脯氨酸分隔以保持相对独立性,使用搭桥法PCR(over lap extension PCR)、酶切、连接等基因工程的方法将各个表位片段串联拼接在一起,组合成重组轮状病毒多表位(RE),将其转入原核载体质粒pTHio His B,构建了重组表达质粒pTH-RE并在大肠杆菌BL21中表达,表达蛋白经SDS—PAGE分析,相对分子量与预期结果相符,大小约44.7KDa;表达蛋白经轮状病毒ELISA快速检测试剂盒检测有免疫原性。将重组轮状病毒多表位插入高效植物表达载体pE1802,构建了重组植物表达质粒pE-RE。利用农杆菌介导法转化烟草,经卡那霉素(Kan)多重筛选,获得抗性植株,对抗性植株提取DNA进行PCR分析,90%抗性植株均呈阳性。选取生长良好的PCR检测为阳性的烟草提取植物蛋白,对表达的重组蛋白进行ELISA检测,阴性对照即非转化植株未显色,转基因烟草样品都能免疫显色。实验结果表明,我们所构建的重组轮状病毒多表位具有一定的免疫原性,证明了重组轮状病毒多表位在烟草中表达的正确性,为以后重组轮状病毒多表位在牧草中的表达提供了理论依据。本研究为研制重组轮状病毒抗原表位亚单位疫苗、转基因植物口服疫苗提供一条新的途径和方法,具有一定的理论意义和应用前景。