IncRNA UCA1在胃癌中的作用及胃癌血浆RNA肿瘤标志物的筛选研究

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肿瘤是一种严重威胁人类生存健康的疾病,具有难于发现、生长迅速等特点。虽然关于癌症的相关研究在不断进步和深化,但到目前为止仍然缺乏有效的治疗手段。胃癌作为亚洲地区高发的消化道肿瘤,其治愈率、5年以上存活率均很低,常规手术治疗后患者的生存质量也很难保证。越来越多的研究表明,RNA在肿瘤的发生发展中扮演着重要的角色,无论是作为肿瘤发生发展过程中的重要元素还是作为外周血肿瘤生物标志物,都很值得研究和探讨。本研究分为三个部分:第一部分重点研究利用芯片技术筛选出的胃癌组织与正常组织差异表达的lncRNA UCA1,该lncRNA在膀胱癌、乳腺癌等多种肿瘤中都被发现高表达,但在胃癌中还是没有相关报道的。我们利用实时定量PCR技术检测了32对胃癌临床样本中UCA1的表达情况,证实UCA1在胃癌肿瘤组织中高表达,体外细胞实验则证实UCA1的异常表达影响胃癌细胞系的增殖和克隆形成能力,对胃癌细胞的侵袭转移、细胞周期和细胞耐药等方面均有影响。抗癌药物阿霉素使胃癌细胞中UCA1表达上调,这种上调与p53相关。第二部分筛选血浆中作为胃癌肿瘤标志物的候选RNA分子。通过转录组芯片分析健康人和胃癌患者血浆中RNA的差异表达谱,采用实时定量PCR对大样本分析结果表明RGS18、ITM2B、PPBP、NAP1L1的mRNA和n324674、 ENST00000442382非编码RNA在胃癌患者的血浆中较对照健康人群表达变化显著。上述RNA的AUC分别为0.6609、0.6037、0.6499、0.5743、0.7096、0.6801,其联合检测AUC为0.7722,高于胃癌检测标志物CEA的0.5370和CA724的0.5845,是潜在的胃癌检测血浆标志物分子。第三部分建立并优化了一种血浆中miRNA的提取方法,为血浆中肿瘤标志物miRNA分子检测提供了新方法。本研究探讨了lncRNA UCA1在胃癌细胞中的作用和在阿霉素作用下UCA1表达上调的原因,UCA1在胃癌中的具体作用机制还有待进一步探究;探讨了血浆中RNA做为胃癌标志物的可行性,成功的建立并优化了一种快速提取血浆中miRNA的方法。上述研究结果为阐释非编码RNA在为胃癌中的作用,以及胃癌血浆RNA标志物的研究提供了线索。肿瘤作为医疗界世界性的难题,严重威胁人类的身体健康。胃癌是亚洲地区乃至世界范围内最高发的肿瘤之一,并且拥有居高不下的致死率,临床上缺乏有效的诊疗手段,手术治疗后患者生存质量差,5年内存活率低。因此研究其致病机制,寻找有效的生物治疗靶点,并开发出既简便易行又准确率高的生化检验诊断方法刻不容缓。LncRNA作为肿瘤机制研究中新的明星分子,在肿瘤的发生发展中起重要的作用,当前关于胃癌中lncRNA的研究并不多见,因此研究胃癌中的lncRNA为胃癌的研究和治疗拓展了新的视野。另一方面,当前胃癌诊断缺少针对性强、灵敏度特异性高的生化检验标志物,外周血中的R NA作为新一代肿瘤生物标志物正迅速的发展起来,寻找有效的肿瘤标志物选择方法并筛选出高灵敏度、高准确性的外周血R NA肿瘤标志物就显得尤为重要。在本研究的第一部分,利用基因表达谱测序法和实时定量PCR法寻找到在胃癌的发生发展中发挥了重要作用的lncRNA UCA1,之后利用CCK‐8实验、克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验及耐药性实验等探究U CA1在胃癌细胞中的功能,并发现在阿霉素刺激下,细胞中的U CA1表达量会上调,而这种上调是通过p53实现的;在本研究的第二部分,利用先进的芯片技术,对健康对照组和胃癌患者组血浆中差异表达的R NA进行分析,针对初步筛选出的R NA扩大样本量利用实时定量法检测,并在性别、年龄、肿瘤分期、瘤体体积等层面进行分析,同时分析了筛选出的RNA作为肿瘤标志物的灵敏性和特异性,并与现有的临床诊断标志物进行比较,在肿瘤组织中也检验了这些RNA的表达情况,显示血浆中的R NA差异可能不是来源于肿瘤组织;本研究的第三部分则是建立并优化了一种新的血浆中R NA提取方法,该方法较之前广泛使用的方法而言,更快捷、成本更低,并且提取效果有很好的保障。实验探究了U CA1在胃癌细胞中的功能;利用新的筛选手段筛选出了胃癌血浆中新的RNA肿瘤标志物;建立并优化了新的血浆R NA提取方法。为关于胃癌的lncRNA研究、血浆诊疗标志物的选择提供了实验依据。
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