目的皮肤具有重要的物理、化学及生物学屏障功能,皮肤创伤所引起的局部或全身损害均与皮肤屏障的丧失有关,尽早修复缺损皮肤并最大可能恢复功能与外观已成为治疗重要目标。传统修复方法有:自体植皮、同种异体植皮、异种植皮和人工合成皮肤产品的应用。但由于供区不足、免疫排斥及传播疾病等缺点,使其应用受到限制,寻找一种理想的皮肤替代物一直是临床上一个亟待解决的难题。组织工程学技术在天然或生物合成材料上接种皮肤干细胞,在生物支架逐步降解吸收的过程中,种植的细胞继续增生繁殖,形成新的组织工程化皮肤,达到修复创伤和重建自身组织功能的目的。因此,“组织工程”的提出为人工构建皮肤替代物提供了崭新且富有挑战性的新方法。在皮肤组织工程中,生物支架材料一直是其研究的热点,其产品血管化成为其发展的瓶颈问题。而近年来研究表明脱细胞小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)和脱细胞羊膜(acellular human amnioticmembrane,HAM)是两种很好的生物支架材料,它们在其它前期临床的实验中表现出了很好的生物相容性,促近伤口愈合,更重要的是对各种损伤组织再生有特异的重塑性。有研究表明这两种生物支架材料对皮肤的创伤愈合有相似的修复效果,这两种支架材料区别在于脱细胞羊膜具有天然的基底膜。基底膜主要由Ⅳ型胶原、Ⅶ型胶原和层粘连蛋白组成。层粘连蛋白LN,是由不同的蛋白质分子组成的一个蛋白质家族,是细胞外基质(ECM)中的非胶原糖蛋白。由Timpl等于1979年首次从鼠ESH肉瘤中发现并命名。它广泛分布于基底膜的透明层,紧贴细胞基底部,与Ⅳ型胶原结合形成基底膜的骨架,影响细胞的黏附、运动,调节细胞的生长和分化。羊膜基底膜厚而连续,LN作为羊膜基底膜特异和主要的蛋白组成成分,具有与Ⅳ型胶原、硫酸乙酰肝素等分子结合的部位,同时还可与上皮细胞结合,触发细胞内的信号转导,促进它们黏附在Ⅳ型胶原上并铺展开,从而促进细胞移行与增殖。我们的研究将脱细胞羊膜、脱细胞小肠黏膜下层覆盖于SD大鼠创伤性皮肤缺损上,观察它们对创面愈合的作用,同时在基因表达水平上检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况,观察它们对创伤皮肤血管形成的影响,拟找到一种对皮肤血管化有更好效果的的生物支架材料。方法1、脱细胞小肠黏膜下层和脱细胞羊膜的制备:将新鲜猪空肠用清水反复冲洗,去除外面的浆膜层和肌层,翻转后,去除黏膜层,用NaOH-HCL联合方法去细胞处理,PBS反复漂洗,冷冻干燥,分装密封,过氧乙酸消毒-70度冰箱储存备用。取健康剖腹产的人羊膜,生理盐水冲净血迹,反复漂洗。0.5%SDS,37度震荡过夜,0.25%胰酶消化2小时,反复PBS漂洗,冷冻干燥分装密封,过氧乙酸毒,-70度冰箱储存备用。2、透射扫描电镜观察制作的生物支架材料表面情况和孔径大小。3、SD大鼠全层皮肤缺损模型的建立:SD大鼠24只,在两侧背部各做1个直径为1.8cm圆形全层皮肤缺损。创面随机分为A组、B组和C组。生理盐水冲洗后,A组HAM覆盖,B组SIS覆盖,C组纱布覆盖。4、用免疫组织化学染色法观察各组大鼠皮肤修复中K19阳性细胞的分布和VEGF表达情况。5、RT-PCR检测各实验组两周时VEGFmRNA的表达情况。6、结合图像采集分析系统,所得数据用均数±标准差((?)±s)表示,应用SPSS11.5统计软件,用单因素方差分析进行组间比较,P<0.05为有统计学意义,p<0.01为有显著统计学意义。结果1、两种支架材料其表面积容积比足够大,保证大量细胞能够迅速长入。孔隙率在60-80%,合适的孔隙大小以及适当的孔隙间连接结构能够提高细胞从周围组织长入的速度和有效性。2、宿主的K19阳性细胞在两种支架材料中的浸润较多,有利于伤口的愈合。3、两种支架材料修复的大鼠皮肤缺损中血管内皮细胞生长因子的表达都强于对照组,且脱细胞羊膜组的血管内皮生长因子的表达强于脱细胞小肠黏膜下层。结论有基底膜存在的脱细胞羊膜增加了SD大鼠皮肤创伤愈合中K19阳性细胞的数目,增强了的真皮中血管内皮生长因子的分泌,有利于皮肤的愈合;同时为进一步探索血管化的问题指出方向。