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研究背景与目的宫颈癌是女性癌症的死亡主要原因之一,发病率和死亡率在不断攀升,并且有年轻化的趋势,已成为全世界范围内的一个重要公共卫生问题。现已证实,宫颈癌的发生与人类乳头状瘤病毒(human papillomavirus, HPV)有着密切关系,但HPV感染者大多在12-30个月内可清除体内病毒,不发展为宫颈癌。因此,宫颈癌的发生除了与HPV感染有关外,协同因子的存在也参与其中,特别是机体免疫状态。当机体免疫系统在与HPV斗争中失败,将导致HPV的持续感染乃至宫颈癌的发生。机体主要的免疫细胞除研究较多的T细胞外,还有巨噬细胞、NK细胞、B细胞等,各种免疫细胞相互作用,维持机体免疫系统的平衡。当这些免疫细胞在功能与数量上发生改变也可导致机体免疫在与病毒抗争中失败,导致宫颈癌的发生发展。既往对巨噬细胞、NK细胞及B淋巴细胞的研究标本主要在宫颈癌患者的外周血或脱落细胞中,但这三种免疫细胞在宫颈癌组织中的检测在国内报道尚少；并且国内目前对于HPV感染与这三种免疫细胞的相互关系的研究亦鲜有报道。本研究拟采用免疫组化方法,检测包含宫颈炎、宫颈癌在内的宫颈病变组织中巨噬细胞、NK细胞及B淋巴细胞的数量；并分析这三种免疫细胞的数量与HPV感染的关系；进一步讨论这三种免疫细胞数量的改变在宫颈癌发生发展过程中的所起到的作用。材料与方法1.收集宫颈病变组织石蜡标本共146例,其中宫颈炎20例,患者平均年龄35.6岁；低级别CIN (cervical intraepithelial neoplasia, CIN)9例(CIN1级),平均年龄31.7岁；高级别CIN34例,(包含CIN2级16例,CIN3级18例),平均年龄40.1岁；宫颈鳞状细胞癌59例,平均年龄45.2岁；宫颈腺癌24例,平均年龄43.3岁。2.采用基因芯片技术对所有病例标本进行23种HPV基因分型检测。3.对所有病例应用免疫组织化学法(immunohistochemistry, IHC)分别进行CD68、CD57及CD20的免疫组化染色。结果1.巨噬细胞在各组宫颈病变组织中的变化。巨噬细胞在宫颈炎、低级别CIN及高级别CIN主要分布于上皮下,在宫颈鳞癌及宫颈腺癌主要分布于癌间质中。巨噬细胞数量分别为：宫颈炎7.17±3.03/每高倍镜视野、低级别CIN(即CIN1级)8.87±0.86/每高倍镜视野、高级别CIN(即CIN2级/CIN3级)8.50±0.40/每高倍镜视野、宫颈鳞癌9.70±2.86/每高倍镜视野、宫颈腺癌12.46±8.47/每高倍镜视野。结果显示：宫颈腺癌及宫颈鳞癌的巨噬细胞的数量最高,显著高于宫颈炎(P均<0.05)；低级别CIN及高级别CIN的巨噬细胞的数量次之；宫颈炎的巨噬细胞的数量最少。2.NK细胞在各组宫颈病变组织中的变化。NK细胞在宫颈炎、低级别CIN及高级别CIN主要分布于上皮下,在宫颈鳞癌及宫颈腺癌主要分布于癌间质中。NK细胞的数量分别为：宫颈炎26.34±15.19/每高倍镜视野、低级别CIN(即CIN1级)21.00±2.02/每高倍镜视野、高级别CIN14.11±0.95/每高倍镜视野、宫颈鳞癌13.05±7.03/每高倍镜视野、宫颈腺癌12.40±6.79/每高倍镜视野。结果显示：宫颈炎及低级别CIN的NK细胞数量最高,明显高于高级别CIN、宫颈鳞癌及宫颈腺癌(P均<0.05)；高级别CIN的NK细胞的数量次之；宫颈鳞癌及宫颈腺癌巨噬细胞的数量最少。3.B淋巴细胞在各组宫颈病变组织中的变化。B淋巴细胞在宫颈炎、低级别CIN及高级别CIN主要分布于上皮下,在宫颈鳞癌及宫颈腺癌主要分布于癌间质中。B淋巴细胞的数量分别为：宫颈炎32.34±22.57/每高倍镜视野、低级别CIN(即CIN1级)29.72±3.36/每高倍镜视野、高级别CIN27.88±5.79/每高倍镜视野、宫颈鳞癌71.38±37.33/每高倍镜视野、宫颈腺癌52.58±30.61/每高倍镜视野。结果显示：宫颈鳞癌及宫颈腺癌的B淋巴细胞数量最高,显著高于宫颈炎、低级别CIN及高级别CIN(P均<0.05)；高级别CIN的NK细胞的数量次之；宫颈鳞癌及宫颈腺癌巨噬细胞的数量最少。4.各组宫颈病变组织HPV基因分型结果。146例病例中,HPV阳性116例,HPV阴性30例,HPV感染率79.45%。其中HPV单一感染中以HPV16、HPV18型(高危型)最多见,分别为54例和19例；余为其它型别的感染,分别为HPV11、31、33、35、42、45、51、52、56、58、59、66,共21例；另外有16例混合型别感染,分别为HPV6.16、16.18、11.16、16.31、16.33、16.52、16.59、16.58、16.68、18.16、31.58、58.6、52.33、16.33.59。5.各组宫颈病变中三种免疫细胞数量与HPV感染关系。宫颈炎HPV阴性患者B淋巴细胞数量为38.89±4.92/每高倍镜视野,明显高于HPV阳性患者的12.68±0.07/每高倍镜视野(P<0.05)；宫颈鳞癌HPV阴性患者B淋巴细胞数量为46.50±2.90/每高倍镜视野、明显低于HPV阳性的72.26±4.99/每高倍镜视野(P<0.05),其余宫颈病变HPV阴性与HPV阳性病例免疫细胞数量差异均不显著(P>0.05)。结论1.在宫颈鳞癌及宫颈腺癌组中巨噬细胞的数量明显高于宫颈炎组、低级别CIN及高级别CIN组,提示宫颈癌组织中巨噬细胞数量增加,而这一改变可能促进肿瘤的发生、发展。2.在宫颈癌中NK细胞的数量明显低于宫颈炎、低级别CIN及高级别CIN,反映了宫颈癌患者NK细胞数量减少,在一定程度上提示宫颈癌患者机体非特异性免疫受到抑制。3.B淋巴细胞在宫颈癌中数量明显高于宫颈炎、低级别CIN及高级别CIN,显示宫颈癌组织中B淋巴细胞数量增加。4.在年龄20-60岁妇女的宫颈病变组织中,有79.45%的病例HPV感染阳性,其中以HPV16,18型最多见。感染率最高的为宫颈鳞癌组,感染率最低的为宫颈炎组。