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分泌表达人血管抑素K(1-3)、内皮抑素的基因工程细胞的构建目的：利用分子生物学和细胞学技术构建筛选出两种分别稳定转染人血管抑素K(1-3)、内皮抑素基因并能分泌表达人血管抑素K(1-3)、内皮抑素蛋白的重组C2C12细胞，为利用移植微囊化基因工程细胞技术将人血管抑素K(1-3)、内皮抑素基因导入体内，进行肿瘤治疗研究奠定基础。
方法：根据文献报道的序列设计引物，利用RT-PCR从人胎肝细胞提取的RNA中扩增人血管抑素K(1-3)、内皮抑素基因，利用重叠延伸PCR技术将人白细胞介素-2信号肽的DNA编码序列融合到内皮抑素基因的5端，T-A克隆到pGEM-T载体中，测序正确后定向亚克隆到真核表达载体pcDNA3中，构建出真核表达载体pcDNA3-ASK(1-3)、pcDNA3-SS-ES。利用脂质体将测序的重组载体转染C2C12细胞，利用G418筛选，进行单克隆培养。从获得的单克隆利用RT-PCR和westernblot筛选出分泌表达目的蛋白的重组细胞克隆。
结果：利用RT-PCR从人胎肝细胞RNA得到的人血管抑素K(1-3)、内皮抑素基因在10g/L的琼脂糖凝胶电泳上分别显示为约1100bp和550bp的条带，与预期大小一致。测序结果中，血管抑素(K1-3)基因中有两处碱基突变，但均属于同义突变。内皮抑素基因序列与GENEBANK中提供的序列一致且其5端与人白细胞介素-2信号肽DNA编码序列成功融合。将pcDNA3-ASK(1-3)、pcDNA3-SS-ES转染C2C12细胞后利用1000μg/ml的G418筛选后有抗性细胞单克隆形成。各挑选八单克隆提取RNA利用RT-PCR检测发现各有两个克隆有目的基因转录。RT-PCR检测出有人血管抑素(K1-3)、内皮抑素基因转录的重组C2C12细胞克隆的培养基上清westernblot检测分别可见46kD、20kD的特异蛋白条带，与文献报道一致。结论：成功利用RT-PCR技术人胎肝细胞RNA中克隆了人血管抑素K(1-3)、内皮抑素基因；成功利用重叠延伸PCR技术在内皮抑素基因的5端融合了人白细胞介素-2信号肽的DNA编码序列。成功构建了真核表达载体pcDNA3-ASK(1-3)、pcDNA3-SS-ES；构建筛选出了两种分别分泌表达人AS(K1-3)、ES的重组C2C12细胞。为利用移植微囊化基因工程细胞将人血管抑素K(1-3)、内皮抑素基因导入体内，进行肿瘤治疗研究奠定了基础。