利用木质纤维素等可再生的生物质资源生产液体燃料和生物基化学品,对经济和社会可持续发展具有重要意义。纤维素燃料乙醇生产工艺中包含纤维素酶合成和木质纤维素酶解糖化等工序,而纤维素酶的成本对于生物质转化乙醇技术的经济可行性是至关重要的因素之一。通常可以通过改善酶系统的组成、使用廉价的培养基和提高酶的生产率来降低纤维素酶的成本。里氏木霉(Trichoderma reesei)作为工业菌株用于纤维素酶生产已有多年历史,是目前酶解纤维素应用得最广泛的产酶菌株。但是一般里氏木霉有一个明显的缺点,即产β-葡萄糖苷酶的能力较弱,分解纤维二糖的能力不强。里氏木霉SCB-18是经过(Δcre1,OE bg11)两步遗传操作,对转录调控网络进行重构来脱除碳降解物阻遏,并对酶系组成进行调整而获得的纤维素酶高产菌株,克服了里氏木霉产β-葡萄糖苷酶能力不足的问题。本论文以里氏木霉(Trichoderma reesei)SCB-18为产酶菌种,对影响SCB-18产酶的培养条件进行了研究,并在5 L发酵罐进行了放大实验。本论文的主要研究内容和结果如下:1、微晶纤维素(MCC)对里氏木霉SCB-18产纤维素酶的影响对比了不同MCC浓度对产酶的影响。结果表明:适当添加MCC可以诱导产酶,过量添加则造成发酵液过于粘稠或因其它未知原因而影响发酵产酶。这提示我们,添加MCC的浓度和控制发酵液的粘度对纤维素酶的生产同样重要。研究还发现MCC的浓度越大,前期发酵产酶速率越慢。通过对比发现MCC的最适添加浓度在4%左右。对比了 MCC不同补料方式对产酶的影响。结果显示,补加MCC没有诱导SCB-18产酶,反而对其产酶造成了阻遏。三种补料方式下的滤纸酶活都明显低于未补料的4%和2%MCC浓度的对照。通过比较补加次数,发现补加越频繁,降低越明显。通过比较补加量,发现实验出现了补量少时降低少,补量多时降低多的现象。2、表面活性剂吐温-80对里氏木霉SCB-18产纤维素酶的影响通过在不同MCC浓度的摇瓶中添加固定量0.1%的吐温-80,发现添加吐温-80可以显著提高里氏木霉的产酶能力。2%MCC浓度的处理比对照增长了45.8%,而4%MCC浓度的处理比对照提高了 24.5%。通过在相同碳源浓度的摇瓶中添加不同浓度的吐温-80,发现虽然不同浓度的吐温-80都可以提高滤纸酶活,但吐温-80的添加量并不是越多越好。一般是底物浓度越大,需要添加的吐温-80越多。3、里氏木霉SCB-18产纤维素酶发酵条件优化及转糖基寡糖液补加研究通过对发酵培养基的优化,找到了适合里氏木霉SCB-18菌株的产酶发酵培养基配方。摇瓶实验显示,在120 h时其滤纸酶活可达到18.5 u/ml,比优化前提高了 3.04倍。在此基础上进行的碱处理麦秆部分替换MCC的结果显示,优化后的处理比对照提高了 2.57倍,展现了较好的工业应用前景。利用含转糖基寡糖的糖液进行了补加碳源实验,结果显示补加含寡糖糖液没有起到诱导产酶的作用,反而产生了葡萄糖阻遏。