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pUDK-HGF是由本实验室构建的携带人肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)基因真核表达的质粒。实验表明pUDK-HGF可促进肢体缺血部位的血管生成，从而改善肢体功能。pUDK-HGF具有开发成为新的基因药物的前途。pUDK-HGF已获中国专利。“重组质粒-肝细胞生长因子注射液”正在注册申请进行肢体动脉闭塞症的基因治疗临床试验。 一、质粒pUDK-HGF的大规模制备和质量分析 质粒pUDK-HGF的大规模制备是其药学研究的关键环节，我们建立了pUDK-HGF中试生产流程，主要包括发酵、细菌碱液裂解、Q-Sepharose XL色谱柱富集质粒、Sephacry S1000凝胶色谱分离、Source15Q色谱精制分离、质粒沉淀、重溶、无菌过滤及分装等步骤。并对发酵条件如培养基、pH值、转速、细菌碱性裂解及色谱分离条件进行了优化。所建立的生产流程重复性良好，质粒DNA的回收率较高(约45％)。经质量检定其产品均符合拟定的各项质量检定指标。所有步骤采用一般生物制品制备方法，没有特殊的技术要求和使用特殊的试剂等，存在进一步放大规模的可能性。 根据相关国外文献报道及我国基因治疗质量控制指导原则，制定pUDK-HGF质粒制造检定规程，并按此逐项对本实验室中试生产制备的05批次pUDK-HGF的质量进行了分析研究。05批次pUDK-HGF的主要质量如下：pUDK-HGF浓度为2.01mg／ml：A260／A280=1.86；超螺旋pUDK-HGF比例为95.09％；电泳图中未见RNA；残留宿主DNA含量＜0.2％质粒DNA；菌体蛋白质残留含量＜0.1％质粒DNA；限制性酶切图谱与自行制备的对照品一致；PCR扩增到HGF基因片段，大小约2.2kb；未见残余抗生素(卡那霉素)抑菌圈；细菌内毒素＜10EU／mg；pUDK-HGF转染的CHO细胞上清中HGF表达量为39.15(ng／ml)，表达的上清诱导ECV304细胞迁移数高于空质粒对照组2倍。05批次的产品经检验符合拟定的质量标准。该批产品已经中国生物制品检定所复核检定合格。