背景: 结肠癌是近年来在国内外发病率和死亡率均呈上升趋势的肿瘤之一。手术仍是治疗的关键手段，而术后放、化疗对提高生存率作用有限。因此，寻求新的结肠癌早期诊断和治疗的方法对于提高其手术切除率和生存率，改善生活质量具有重要的意义。随着肿瘤免疫学和分子生物学研究的进展，结肠癌发生发展和转移的分子机制已经部份阐明，为结肠癌的基因治疗提供了理论基础。本课题组的前期研究证明脆性组氨酸三联体(FHIT)基因表达缺失在结肠癌的发生、发展中起着重要的促进作用，但目前其应用于基因治疗总的效果仍不理想，许多还处于临床前实验阶段，加上人体基因表达机制十分复杂，到目前为止有些环节还不清楚，需要继续深入研究，以便更好地发挥基因治疗的作用。外源性FHIT基因转染入FHIT基因表达缺失的结肠癌中诱导癌细胞凋亡的分子机制一旦明确，将为结肠癌的治疗提供全新的分子治疗策略。 目的: 克隆人FHIT基因，构建其真核表达质粒pRc/CMV2-FHlT；观察FHIT基因转染对肠癌细胞株SW480细胞基因及蛋白表达的影响，了解FHIT基因诱导结肠癌细胞株SW480细胞凋亡和细胞生长周期阻滞情况；为将FHIT基因应用于结肠癌的临床治疗奠定基础。 方法: 1、提取人外周血总RNA，用逆转录．聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增人FHITcDNA全长开放阅读框序列，PCR产物与中间载体pGEM-T连接后转化到大肠杆菌DH5a，然后对单菌落进行菌落PCR、限制性内切酶酶切鉴定和测序。用EcoR Ⅰ将目的片段切下，插入真核表达载体pRc/CMV2的相应位点，构建表达质粒pRc/CMV2-FHIT，将该重组质粒转化到大肠杆菌DH5a后进行菌落PCR、酶切鉴定。 2、通过脂质体将表达质粒pRc/CMV2-FHIT稳定转染到结肠癌细胞株SW480，应用RT-PCR技术检测FHIT mRNA水平的变化、Western blot测定培养液上清FHIT蛋白浓度、流式细胞仪观察细胞周期及细胞凋亡能力的改变，同时设空白组以及空质粒转染组作为对照。 结论: 1、成功构建重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT，为进一步通过脂质体将FHIT基因导入FHIT表达缺失的各种肿瘤细胞株，从而逆转肿瘤发生进程，继而发现肿瘤基因治疗方法的相关研究奠定基础。 2、FHIT基因转染后结肠癌细胞株SW480 FHIT基因及蛋白表达增加，FHIT基因能诱导SW480细胞凋亡及细胞周期阻滞，提示凋亡异常可能是结肠癌发生发展的重要原因，FHIT基因可能参与结肠癌细胞凋亡的调节。