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神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase)是糖酵解途径中一种重要的生物酶,其特异性存在于神经元、神经内分泌细胞中。血清NSE水平的变化作为敏感的病理学标志蛋白以及中枢神经系统损伤时的定量指标正逐渐被重视,且血清NSE已成为小细胞肺癌(SCLC)诊断中最敏感的肿瘤标志物。随着研究的进一步深入,非小细胞肺癌(NSCLC)神经内分泌化逐步引起人们的重视,神经内分泌产物NSE在NSCLC中的地位也越来越受关注。总之,NSE作为神经内分泌性质肿瘤的标志物及神经元损伤的标志物,已越来越受国内外学者的关注。
在这个大背景下,为了进一步研究NSE在肿瘤与临床方面的意义与应用。我们通过基因工程技术构建了带有GST标签和His标签的NSE原核表达载体,将构建好的表达载体转化原核宿主菌,表达和纯化了NSE融合蛋白。并用NSE融合蛋白作为抗原免疫新西兰家兔。当我们收集到大量高效价的多抗兔血清后,对这些兔多抗血清进行纯化,采用了两种方法:一种是用Protein G亲和层析柱进行大量的纯化,这种方法方便快速,可以进行大批量的处理,但是不能去除抗血清中的其他抗体。第二种方法是免疫亲和吸附纯化法,用His标签的NSE融合蛋白作为抗原来特异性吸附抗体,这样就可以得到NSE的特异性抗体,缺点是不能大规模操作。NSE特异性抗体的获得将为我们今后的研究工作提供实验基础。