【摘 要】
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本文首先检测了CHMO(环己酮单加氧酶)和PAMO(苯基丙酮单加氧酶)两种酶对4-甲基环己酮的氧化作用。原始的PAMO酶无氧化作用。对PAMO基因Gln93Asp/Pro94Asp两个点突变后,能够催化4-
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本文首先检测了CHMO(环己酮单加氧酶)和PAMO(苯基丙酮单加氧酶)两种酶对4-甲基环己酮的氧化作用。原始的PAMO酶无氧化作用。对PAMO基因Gln93Asp/Pro94Asp两个点突变后,能够催化4-甲基环己酮,但是催化活力极低。对4-甲基环己酮催化活力比较高的CHMO酶进行生物催化研究。通过自诱导的方法极大的提高了CHMO的酶活,提高了26倍左右。
为了解决底物和产物对CHMO酶催化氧化4-甲基环己酮的抑制问题,初步研究了树脂原位底物供给和产物分离技术。对9种树脂进行筛选比较,得到一种对4-甲基环己酮及其产物具有较强吸附作SD600,对树脂和底物的添加比例进行比较,得出1∶2的添加比例比较好。此时溶液中底物浓度既不能抑制酶的活性,同时反应还能以较快的速率进行。通过树脂原位底物供给和产物分离技术(SFPR),CHMO催化4-甲基环己酮的底物浓度得到了提高。50mM的底物浓度条件下,转化率达到了60%左右,而不加树脂的时候,转化率只有6%左右,转化率提高了10倍左右。树脂原位底物供给和产物分离技术有效地解决了底物4-甲基环己酮及产物对CHMO的抑制作用,具有广阔的工业应用潜力。
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