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本文主要检测复杂食品中双酚A,通过条件优化和方法学评估,建立了免疫亲和柱高效液相色谱法、化学发光酶联免疫吸附分析法、免疫亲和柱-同位素稀释液质质法三种检测方法。另外,通过化学偶联法和细胞融合法完成了抗双酚A-抗吖啶酯双特异性抗体的制备,探索一种更便捷有效的基于双特异抗体检测BPA的免疫化学发光检测方法。1.免疫亲和柱-高效液相色谱法的建立及其方法学评价建立了样品经免疫亲和柱净化,高效液相色谱检测双酚A的方法。以安捷伦C18反相色谱柱进行分离,甲醇-水（55:45）为流动相,荧光激发波长227 nm,吸收波长313 nm。在此条件下,BPA标准溶液在1-200 ng/ml范围内有良好的线性关系。对啤酒和牛奶两种样品的加标回收率在74.56%-109.67%之间,变异系数在1.04%-9.77%范围内。啤酒样品的检测限和定量限分别是0.28 ng/ml和0.95 ng/ml,牛奶样品的检测限（S/N=3）和定量限（S/N=10）分别是0.5 ng/ml和1.5 ng/ml。2.化学发光酶联免疫吸附分析法的建立及其方法学评价建立了化学发光酶联免疫吸附分析法,研究了酶标二抗浓度、pH、离子强度、有机溶剂浓度对酶免疫化学发光强度（RLU）和半抑制浓度(IC50)的影响,以RLU/IC50最大为判定标准,选择合适的抗原抗体反应条件。通过上述条件优化,确定了BPA抗原与抗-BPA抗体的最佳反应条件是抗原包被浓度为1 ug/ml,酶标二抗稀释比例为1:3000,以pH8.0含0.8 mol/L NaCl的0.01M PBS稀释BPA抗体,以超纯水配制系列标准溶液。在此条件下建立竞争抑制曲线,其线性范围是0.25-50 ng/ml,IC50是3.33 ng/ml,对牛奶样品进行三个水平的加标回收实验,平均加标回收率范围是94.98%-112.91%,变异系数范围是0.93%-3.96%。3.免疫亲和柱-同位素稀释液质质法的建立及其方法学评价建立了免疫亲和柱净化,同位素稀释-超高效液相色谱（UPLC）串联三重四级杆质谱（MS）测定啤酒、牛奶和罐头鱼三种食品中双酚A的检测方法。以Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18色谱柱进行分离,甲醇和体积分数0.1%的氨水为流动相梯度洗脱,采用电喷雾离子源（ESI）,多反应监测（MRM）负离子模式采集数据。该方法在1-200 ng/ml范围内有良好的线性关系。对三种样品的加标回收率在76.70%-112.91%之间,变异系数范围0.93%-14.34%,啤酒样品的检测限和定量限分别是0.33 ng/ml和1 ng/ml,牛奶样品的检测限和定量限分别是0.5 ng/ml和1.5 ng/ml,罐头鱼样品的检测限和定量限分别是1 ng/g和3.5 ng/g。对市售三种样品的调查结果显示,三种样品中BPA的含量啤酒样品<牛奶样品<罐头鱼样品。啤酒样品中BPA检出率为75%,罐头鱼样品中BPA的检出率高达100%。罐装牛奶中全部检出BPA,而纸盒装牛奶中则均无BPA检出。4.化学偶联法制备抗BPA-抗吖啶酯（AE）双特异性抗体利用双功能试剂sulfo-SMCC偶联抗BPA单克隆抗体和抗AE单克隆抗体制备抗BPA-抗吖啶酯（AE）双特异性抗体,分别优化了pH、反应时间、反应物摩尔比等参数对反应的影响,结果显示,反应的影响因素均是摩尔比>pH>反应时间,根据吖啶酯化学发光和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果可知,成功制备了抗BPA-抗AE双特异抗体。5.细胞融合法制备抗BPA-抗吖啶酯（AE）双特异性抗体采用三体杂交瘤法制备抗BPA-抗吖啶酯（AE）双特异性抗体,将对HAT敏感且能稳定分泌抗-BPA单克隆抗体的杂交瘤细胞与免疫抗原AE-KLH（血蓝蛋白）免疫的小鼠脾细胞进行融合。完成了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶缺陷株细胞的筛选、小鼠的免疫,并采用电融合法经过三次融合成功挑选出一株抗BPA-抗KLH的三体杂交瘤细胞株,命名为1H4。