超促排卵与自然受孕SD大鼠子代海马区CREB蛋白表达的比较及与认知记忆关系的研究

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目的:为了探讨超促排卵是否会对其子代的神经系统发育产生影响,本实验通过对SD大鼠行超促排卵技术,进一步研究其子代的的学习记忆能力,并对海马区可能相关的蛋白表达情况进行探究。方法:提前1周购买7周龄SD大鼠(雌鼠20只+雄鼠20只),按SPF级别动物饲养规范,至所有大鼠熟悉新的生活环境,随机分2组,每组10对(10只雌鼠+10只雄鼠),均在每天上午7:00-8:00行阴道涂片,对进入发情前期的大鼠于当天下午15:00,随机选一组进行腹腔内注射PMSG 40IU,48小时后再次注射等量HCG。另一组于同时间点腹腔内注射40IU生理盐水。将注射PMSG与HCG的雌鼠与雄鼠合笼,每笼2只(1只雌鼠+1只雄鼠),标记为COH组作为研究组;注射等剂量生理盐水的雌鼠与雄鼠合笼后标记为对照组,每笼2只。SD大鼠的孕期为21天左右,继续按照SPF饲养规范,至子代大鼠出生,将雄鼠取出笼子。待子代大鼠1月龄后将所有雌鼠(包括母代雌鼠,因已过哺乳期)取出。记录各组子代大鼠出生时的只数和重量,待40天龄时随机从COH组中取16只子代大鼠、随机从对照组中取9只子代大鼠进行称重并分别标记为COH幼组和对照幼组。待8月龄时再随机从COH组中取14只子代大鼠、随机从对照组中取13只子代大鼠进行称重并分别标记为COH中组和对照中组。对称重后的40天龄和8月龄的子代大鼠分别进行Morris水迷宫实验,对其学习记忆能力进行监测。在子代大鼠Morris水迷宫测试完成后,进行腹腔麻醉、心脏灌注等处理,断头取脑,分离出整个海马,用于Western blot检测,探究海马区可能相关的CREB蛋白的表达情况,为人类通过超促排卵出生子代的儿童期、中年期的神经系统发育情况提供预估参考。结果:COH组在合笼后22-24天生产,出生只数15.8±2.9只,出生时体重6.44±0.67克;而对照组在合笼后45-60天生产,出生只数10.5±3.1只,出生时体重7.83±0.64克,COH组与对照组出生只数有统计学差异(P<0.05);COH组与对照组子代大鼠出生重量差异无统计学意义(P>0.05),但是前者有下降的趋势。COH幼组子代大鼠重量为183.81±12.46克,对照幼组子代重量为189.78±9.28克,差异无统计学意义(P>0.05)。COH中组子代大鼠的重量为320.21±15.3克,对照中组子代大鼠的重量为331.54±14.48克,差异无统计学意义(P>0.05)。在Morris水迷宫空间探索任务中,每天的潜伏期时间进行比较,COH幼组和对照幼组在第一天至第六天的P>0.05,而第七天COH幼组(14.90±10.25)的潜伏期时间显著大于对照幼组(8.57±2.80),P<0.01;COH幼组(35.13±17.46)和COH中组(46.74±16.94)第一天的P<0.01;而第二天至第七天的P>0.05;对照幼组和对照中组的第一天(31.06±11.66;45.79±17.04)、第二天(22.40±15.60;33.53±15.77)、第三天(21.79±14.64;29.48±17.75)、第七天(8.57±2.80;16.18±9.55)的P<0.05;而第四天、第五天、第六天的P>0.05。在Morris水迷宫工作记忆任务中,对照中组与对照幼组的潜伏期(20.77±16.3;14.87±9.69)比较P<0.05;游泳的总距离(341.72±315.35;230.93±173.03)比较P<0.05。各组子代大鼠经过Morris水迷宫训练后海马区CREB蛋白表达比较均无统计学差异。结论:超促排卵子代大鼠在幼年期和中年期表现出与同期正常受孕子代大鼠相同的空间学习和空间记忆能力,但是出生只数的增加和低出生重量可能是使超促排卵幼年期子代大鼠空间学习能力下降的重要因素。
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