BADH基因转化国槐及黄金槐的研究

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山东省有大量的滨海和内陆盐碱地,培育和选择抗盐碱植物种质是我省林木育种的重要目标。国槐(Sophora japonica L)、黄金槐(Sophora japonica var golden)是蝶形花科落叶乔木,是优良的多用途树种,具有重要的生态和经济利用价值。本研究以国槐转rd29A基因植株为材料,进行了相关耐盐生理生化指标的测定研究,为耐盐新种质试验推广提供了理论基础,并进一步导入BADH(山菠菜甜菜碱醛脱氢酶)基因,获得了转rd29A和BADH两个基因的国槐株系;同时,以黄金槐组培苗为材料,转入BADH基因,获得了耐盐新种质。具体结果如下:1.以转rd29A基因国槐株系及其受体亲本试管苗为材料,在NaCl胁迫下,分别在处理后不同时间测定了耐盐生理指标。结果表明:在0.6 % NaCl胁迫下,国槐植株内可溶性糖含量、脯氨酸含量,丙二醛含量以及相对电导率都随NaCl胁迫时间的延长而增加;与受体亲本植株相比,转基因株系的叶绿素含量、细胞渗透调节物质含量和细胞膜稳定性提高。说明转rd29A基因的国槐植株耐盐性得到提高。2.运用农杆菌介导法以转rd29A基因国槐为材料继续转入BADH基因并对其转化方法进行了优化。研究结果表明:适宜的农杆菌浓度OD600值为0.3-0.5,侵染时间为15-20 min;平板培养法活化农杆菌、延迟两周筛选、用200μM AS溶液浸泡伤口可以提高转化率;转化前的低温预培养及转化时抽真空的方式不能提高转化效率。经过以上条件的优化获得了PCR检测呈阳性的植株,阳性检测率为16.7 %,表明外源目的基因己整合到国槐基因组中。3.以黄金槐大叶片作为外植体,筛选出诱导不定芽分化的最佳培养基为:MS + 6-BA 4 mg/L + IBA 0.5 mg/L,确定了黄金槐遗传转化中适宜的抑菌浓度为Cef 400 mg/L,同时也确定了抗生素的临界浓度及适宜的添加时间,试验选用Kan浓度为100 mg/L作为筛选转化体的适宜浓度,侵染10-15 d后添加Kan可获得较多的抗性芽;并利用根癌农杆菌介导法将BADH基因导入黄金槐,PCR阳性检测率为19.4 %,表明BADH基因已成功导入黄金槐。
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