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干细胞和组织工程的发展为治疗肌肉骨骼系统的损伤和再生提供新的思路，然而干细胞的定向分化是其走向临床安全有效应用的前提。目前诱导间充质干细胞定向分化成成熟肌腱细胞的策略方法虽然很多，但是效果效率各异。本研究致力于创建高效可靠的肌腱分化诱导方案，比较评估了前期报道的具有腱系诱导潜力的生长因子TGFb1、CTGF和BMP12的单一诱导效果和相互组合诱导效果。根据肌腱特异转录因子SCX的表达，发现TGFb1能在短时间能迅速提升SCX的表达水平，与其他生长因子的组合并无叠加效应。通过天狼猩红染色评估胶原分泌水平，发现TGFb1具有促进间充质干细胞细胞外基质的分泌能力，与其他生长因子联合作用并无叠加效应。但是肌腱系的另一个标志基因TNMD的表达水平，在诱导3天各组并无显著变化，在诱导7天时发现TGFb1联合CTGF组与三种生长因子组合组具有显著的提升。因此，我们制定了分步诱导的方案，先单独使用TGFb1诱导3天启动肌腱系的分化，再联合CTGF诱导7天，促进间充质干细胞向肌腱系分化成熟，通过1、3、5、7、9天QPCR对于肌腱系转录因子和细胞外基质蛋白的表达水平进行检测证实该诱导方案有效可行。进一步利用裸鼠异位肌腱再生模型，评估经过诱导的间充质干细胞与未经诱导的间充质干细胞的肌腱再生效果，术后4周6周的组织学结果显示经过诱导的间充质干细胞形成的肌腱组织更成熟。最后，在大鼠髌腱损伤模型上评估经过诱导的间充质干细胞与未经诱导的间充质干细胞的肌腱修复质量，术后2周和6周通过HE染色、三色染色、偏振光和免疫组化评估均证实经过诱导的间充质干细胞修复的肌腱组织质量更好。该研究在体外和体内证实组合分步诱导干细胞腱系分化的可行性和有效性，为进一步推进组织工程技术的临床转化应用提供了实验依据和思路。