产低温果胶酶菌株的筛选、发酵条件及酶学性质的研究

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本论文进行了低温果胶酶产生菌的筛选,并对菌种的产酶条件,低温果胶酶的酶学性质,分离纯化及动力学常数进行了研究。对采集到的118份土样进行菌种的筛选后,得到一株产低温果胶酶的菌株LP272,经鉴定该菌属于指甲隐球酵母。经过试验得出:该菌株的最适生长温度是25℃,最适产酶温度是25℃,最适酶反应温度25℃,最适酶反应pH值为pH5.8。酶液的pH值稳定范围在pH5~6.4,在25℃保温3h,酶活降至50.5%,在35℃保温2h,酶活降至55.1%,在45℃保温1.5h,酶活降至48.7%,在55℃保温1h,酶活降至43.1%。研究了发酵培养基组成及发酵条件对菌株产酶的影响,通过正交试验优化得出该菌株产酶的最佳发酵培养基组成为:桔皮粉2.0g,葡萄糖1.5g,蛋白胨0.5g,酵母膏0.5g,CaCl2 0.1g,SDS 0.4g,K2HPO40.2g,KH2PO4 0.05g,蒸馏水100ml,pH5.6。最佳发酵条件为培养温度25℃,培养时间36h,转速200rpm,装样量50ml。金属离子Mg2+、Ca2+、Mn2+、Zn2+、Fe2+、Na+对低温果胶酶有激活做用,而Ba2+、Hg2+、Cu2+、Fe3+、Pb2+对低温果胶酶有强烈的抑制做用。用硫酸铵盐析法对酶液进行初步分离纯化时,硫酸铵饱和度范围选定为:40-85%。当以果胶为底物时,该酶的动力学常数Km为27.86mg/mL , Vmax为152.13μmol/(min·ml)。
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