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肺纤维化(Pulmonary Fibrosis,PF)主要特点是病变在肺内分布不均一,主要累及肺间质、肺泡和细支气管等肺实质。正常的肺间质主要包括两种成分：细胞和细胞外基质。流行病学得出,肺纤维化发病率、死亡率不断上升,日前5年生存率<50%。糖皮质激素和免疫抑制剂及细胞毒性药物仍作为临床主要用于治疗的药物,但疗效一般且具有明显的毒副作用。肺成纤维细胞的过度增生和分泌胶原在肺纤维化形成过程中扮演了重要的角色。因此,寻找有效药物抑制肺成纤维细胞的过度增生是防治肺纤维化的重要手段之一。枇杷叶是蔷薇科枇杷属枇杷的叶,作为治疗呼吸道炎症性疾病的常见中药材之一,具有悠久的历史。本课题组前期研究证实为三萜酸(Triterpene acids of loquat. leaf, TAL)是其有效活性部位；TAL除具有显著的抗炎免疫调节功能之外,还证实其对慢性支气管炎具有明显的疗效。病理学指出：慢性支气管炎和肺纤维化均表现出慢性炎症,且在病情进展过程中慢性支气管炎为肺纤维化的前期阶段。大量文献中研究结果显示在纤维化病程中肺泡巨噬细胞(AM)对成纤维细胞(FB)激活、表型转化起到重要的调节作用,而转化生长因子-β1(TGF-β1)可能是此过程中的关键因子。本课题选用气管内注如盐酸平阳霉素的方法建立SD大鼠肺纤维化模型,实验中采用阳性对照药地塞米松片,探讨肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞中细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、TGF-β1过度表达情况；在此基础上进一步展开了在细胞因子TGF-β1诱导下成纤维化细胞发生转型分化、细胞外基质大量沉积的机制研究。主要内容概括如下：1.枇杷叶三萜酸对肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、TGF-β1表达的影响目的：研究枇杷叶三萜酸(TAL)对盐酸平阳霉素诱导的肺纤维化大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、TGF-β1表达的影响。方法：通过气管内一次性滴注盐酸平阳霉素(5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型。治疗组于造模后第2天开始灌胃给予不同剂量的TAL或地塞米松,直至28天造模结束。各组大鼠于给药后第28天,取固定部位肺组织石蜡切片HE染色和masson染色；采用RT-PCR法检测肺泡巨噬细胞(AM)中TNF-α、TGF-β1 mRNA的表达；ELISA检测AM培养上清中TNF-α、TGF-β1蛋白的表达。结果及结论：TAL对大鼠肺纤维化有一定的防治作用,其机制可能与减少肺泡巨噬细胞中TNF-α、TGF-β1生成有关；通过线性相关分析发现TGF-β1的产生与AM中TNF-α表达量成正相关,R值0.907(p=0.015)。2.枇杷叶三萜酸对TGF-β1刺激的人胚肺成纤维细胞增殖及MAPK通路的影响目的：研究枇杷叶三萜酸(triterpene acids of loquat,TAL)对TGF-β1刺激人胚肺成纤维细胞增殖分化、胶原合成及MAPK通路的影响。方法：体外培养人胚肺成纤维细胞(HFL-Ⅰ),调整HFL-Ⅰ细胞浓度为1×106/ml,加入实验剂量的TAL 2小时后添加刺激因子TGF-β1。MTT比色法测定TAL对HFL-Ⅰ细胞的增殖的影响；RT-PCR检测每组中CTGF、α-SMA.Ⅰ型胶原(CⅠ)、Ⅲ型胶原(CⅢ)mRNA的水平；western-blotting检测各组细胞中P-ERK1/2和ERK1/2表达水平。为进一步探讨其可能作用机制,通过western-blotting检测HFL-Ⅰ细胞p-ERK蛋白表达,筛选出ERK阻断剂PD98059的最佳浓度,检测TAL对TGF-β1介导的CTGF蛋白表达的影响。结果及结论：TAL能抑制TGF-β1诱导的HFL-Ⅰ的增殖,使过表达的α-SMA、CTGFmRNA降低,对p-ERK1/2、p-JNK和p-P38皆有一定抑制作用。提示,TAL可能通过抑制α-SMA的生成来阻断成纤维细胞向肌成纤维细胞转化；通过降低CTGF过度表达,减少ECM的沉积；TAL对MAPK调控可能发生在ERK、JNK和P38蛋白磷酸化环节；TAL和ERK阻断剂PD98059对TGF-β1介导的CTGF的表达均有明显的抑制作用,且两者同时作用时抑制作用最强。提示,TAL对TGF-β1介导的CTGF表达的抑制作用可能与其阻断ERK信号传导通路有关,与JNK、P38两条通路是否有关有待于后续研究进一步证实。