论文部分内容阅读
目的:观察中药解毒通络方对Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)急性期临床症状、中枢神经系统病理学改变、脑和脊髓组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的影响,探究MS在发病急性期部分病理机制,为临床治疗多发性硬化(MS)急性期、挽救神经功能损伤提供新的途径。方法:(1)准备健康雌性Wistar大鼠80只,按随机数字表法分为:空白组、模型组、激素组、中药组,每组20只。空白组大鼠不造模,不用药,每天给与生理盐水0.2ml灌胃;模型组EAE后开始每天给与生理盐水0.2ml灌胃;激素组EAE后7天开始给予地塞米松药液灌胃;中药组EAE后7天开始给中药液灌胃,以上灌胃方法均灌胃至实验终止。(2)EAE模型建立:采用豚鼠脊髓匀浆和完全福式佐剂(CFA)制成的混合液作为诱导各组模型大鼠抗原,届时一并给予皮内注射百日咳疫苗。每日观察EAE后各组动物的临床症状表现、行为学改变,测量体重变化情况,并给予神经功能的评分。(3)样本采集:分别于免疫后第14天和第21天,心脏灌流后取脑和脊髓组织置于4%多聚甲醛中固定,石蜡包埋、切片。(4)苏木素-伊红(HE)法染色观察脑、脊髓病理改变;免疫组化法测定组织内MMP-9含量。(5)统计学处理,采用SPSS 19.0软件包分析处理。结果:(1)大鼠发病率、神经功能评:在第7d,空白组大鼠均无发病,模型组、激素组和中药组间大鼠发病率及神经功能评分比较无统计学意义(P>0.05)。EAE各组大鼠均出现体重轻度下降,相比均无统计学意义(P>0.05)。(2)EAE后14d大鼠神经功能评分:中药组与激素组相比无显著统计学差异(P>0.05),中药组、激素组分别与模型组相比均明显降低,统计学差异显著(P<0.01),中药组与激素组比较无显著统计学差异(P>0.05);组织病理学切片炎性细胞数相比:中药组和激素组相比无显著性统计学差异(P>0.05);中药组、激素组分别与模型组相比炎性细胞数均明显减少,统计学差异明显(P<0.01);MMP-9的表达:中药组、激素组与模型组相比均有显著差异(P<0.01),中药组与激素组相比无显著统计学差异(P>0.05)。(3)EAE后21d大鼠神经功能评分:中药组与激素组相比无明显统计学差异(P>0.05),中药组、激素组分别与模型组相比均明显降低,统计学差异明显(P<0.01),组织病理学切片炎性细胞数相比:中药组和激素组相比无明显统计学差异(P>0.05);中药组、激素组分别与模型组相比炎性细胞数均明显减少,统计学差异明显(P<0.01);MMP-9的表达:中药组、激素组与模型组相比均无显著统计学差异(p<0.01),激素组与中药组比较无显著统计学差异(p>0.05)结论:(1)采用豚鼠脊髓匀浆添加完全弗氏佐剂并联合灭活减毒百日咳杆菌诱导wistar大鼠eae模型稳定可靠,发病率高。(2)在14d急性期时模型组mmp-9表达较空白组明显升高,激素组、中药组mmp-9表达较模型组减少显著,统计学差异显著;21天缓解期中药组mmp-9表达较激素组低,以上差异无显著统计学差异。(3)解毒通络方能够明显降低eae大鼠中枢神经系统炎症反应,降低eae大鼠神经功能损伤可能是通过抑制急性期mmp-9的表达,减少血脑屏障破坏实现的,保护大鼠神经功能。(4)解毒通络方用于多发性硬化模型急性期的治疗安全,远期疗效显著。