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目的探讨福尔马林固定、石蜡包埋组织中提取DNA的最佳方法。方法①根据石蜡切片厚度(2.5μm、5.0μm、10.0μm)、组织切片脱蜡时间(切片脱蜡2次,时间分别为2小时、2小时和2小时、12小时)、消化液中蛋白酶K浓度(125μg /ml、250μg /ml、500μg /ml、1000μg /ml)、组织消化时间(4小时、8小时、12小时、24小时)等参数的不同,排列组合出96种不同条件,分别用于提取DNA。②石蜡组织连续切片,切片在二甲苯恒温水浴中振荡脱蜡后无水乙醇漂洗,真空干燥,加入细胞裂解液(自制),恒温水浴中振荡消化组织,苯酚/氯仿/异戊醇反复抽提,醋酸钠沉淀DNA,离心去上清,保存DNA备用。③不同方法提取的DNA量的检验:稀释200倍的DNA溶液用分光光度计在260nm和280nm分别读出光密度值,即OD260值和OD280值,DNA含量为:OD260值×10(μg/μl)。④不同方法提取的DNA质的检验:所有标本的OD260/OD280值均应该在1.6-1.8范围内,说明DNA中无蛋白、RNA和苯酚污染。PCR反应扩增所提取的DNA中RET基因第11外显子,10μl PCR产物经2.0 %的琼脂糖凝胶电泳,初步判断提取的DNA是否可以用于PCR反应;从琼脂糖凝胶中纯化目的基因DNA后再次以分光光度计测量纯化后的DNA含量,比较提取的DNA经PCR扩增后目的基因的产量;纯化后的PCR产物经荧光标记后自动测序仪测定目的基因碱基序列,观察提取的DNA是否可以用于直接序列测定。结果所有标本提取的DNA之OD260/OD280值均在1.6-1.8范围内。各种石蜡切片厚度均可以提取一定数量的DNA,三组石蜡切片厚度之间比较无明显差异。但2.5μm组提取的DNA用于PCR扩增时效果远不如其它2组,即使PCR扩增后PCR产物电泳虽可见目的基因条带,条带也较淡,目的基因测序图混乱,难以读出碱基序列;2次脱蜡时间为2、2小时组脱蜡效果不如2次脱蜡时间为2、12小时组;随着蛋白酶K浓度的增加,提取的DNA数量也增加,最后行DNA测序时蛋白酶K浓度为500μg/ml和1000μg/ml组均可以得到满意的DNA测序图;组织消化8小时、12小时和24小时得到的DNA均适用于序列测定,但8小时组提取的DNA经PCR扩增后产物较12小时和24小时组少,12小时组与24小时组间比较无明显差别。目的基因DNA含量大于16ng/μl的标本测序时测序图较好,否则不适合于测序。结论从中性福尔马林固定-石蜡包埋组织中可以提取高质量DNA,在提取DNA过程中应注意剔除石蜡切片中坏死组织区域,高温降解核酸酶和蛋白酶K等步骤有利于下一步实验取得理想的结果。提取DNA的最佳条件是:石蜡切片厚度为10.0μm;脱蜡时间以2次脱蜡,时间分别为2、12小时,可以满足10.0μm厚切片的完全脱蜡;消化液中蛋白酶K浓度为500μg/ml,消化12小时组织可以完全被消化。