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背景:Flt3L是树突状细胞(DCs)分化关键的细胞生长因子,在体内Flt3L及其受体Flt3能调节骨髓造血祖胞沿着DC发育途径分化成多种不同类型的DCs,尤其是浆细胞样树突状细胞(p DCs)。p DCs作为抗原提呈细胞中重要的一员,在调节固有免疫和适应性免疫反应中发挥着十分重要的作用。肠道免疫系统功能的紊乱在炎症性肠病发病机理中扮演着重要的角色。DCs作为适应性免疫反应的启动者,肠道组织中也分布有p DCs,如肠系膜淋巴结、肠道固有层等。然而,p DCs在炎症性肠病中发挥的作用和机制,目前鲜有报道。目的:探究Flt3L在TNBS诱导的小鼠实验性肠炎中的作用,并阐明其作用机制。方法:1.GST-Flt3L融合蛋白的提取和纯化:实验室课题组前期已经构建好含PGEX-4T3-m Flt3L重组质粒的BL21大肠杆菌。在LB液体培养基中经IPTG诱导,大量表达融合蛋白GST-Flt3L,再用亲和层析柱纯化融合蛋白,并用SDS-PAGE和Western Blot技术检测融合蛋白。2.小鼠实验性肠炎模型的制备:第0天,小鼠称重后,经直肠给予TNBS,诱导小鼠患实验性肠炎,每天记录小鼠体重。于第4天处死小鼠,收集组织样本。3.小鼠腹腔注射Flt3L后,再造肠炎模型:小鼠腹腔注射Flt3L 10ug/天,连续10天,对照组用同样方法给对照药。第11天,再用TNBS诱导小鼠患肠炎。4.收集实验组和对照组样本,检测相关指标。5.体外培养小鼠骨髓来源的p DCs,磁珠分选得到高纯度的p DCs后,给予CPG-A ODN或TNBS刺激,再与CD4+T细胞共培养,流式检测CD4+T细胞分化成Treg细胞比例,Elisa检测细胞培养上清中IL-10含量。6.检测方法与指标:(1)Western blot检测GST-Flt3L融合蛋白;(2)诱导小鼠肠炎后检测小鼠体重、结肠长度、大体评分等指数变化;(3)HE染色检测小鼠结肠组织组织病理学改变以及组织病理评分;(4)流式细胞术检测小鼠脾脏和淋巴结中p DCs的比例;(5)流式细胞术检测体外共培养细胞中Treg细胞的比例;(6)Elisa检测细胞培养上清中IL-10的含量。结果:1.成功提取纯化GST-Flt3L融合蛋白;2.成功建立TNBS诱导的小鼠实验性肠炎;3.与对照组相比,Flt3L能够显著提高肠炎小鼠体内p DCs的比例,并且改善小鼠肠炎的临床症状;4.体外培养体系中,p DCs能够促进CD4+T细胞向Treg细胞分化,并且提高IL-10的分泌水平。结论:Flt3L能提高小鼠体内p DCs的比例,促进CD4+T细胞向Treg细胞分化,并且提高其IL-10的分泌,缓解TNBS诱导的小鼠实验性肠炎。