水溶性荔枝多糖的超高压提取技术及其结构和生物活性研究

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荔枝(Litchi chinensis Sonn.)是一种广泛生长在热带、亚热带地区的水果,富含较多的碳水化合物、维生素、蛋白质和有机酸等多种对人体有益的营养物质。本课题采用超高压技术,在常温条件下,从荔枝果肉中提取出水溶性荔枝多糖,并对提取工艺、提取方法、分离纯化、多糖结构以及抗氧化活性进行系统的研究。主要研究结果如下:1.以多糖得率为响应值,考察了超高压提取水溶性荔枝多糖的工艺。在单因素基础上,利用响应面分析优化出水溶性荔枝多糖的最佳提取工艺为时间17.19 min、液料比15:1、压强463.9 MPa。经验证试验,所得结果最高得率为12.01±0.23%,其与理论预测值基本一致;且响应面优化得到的回归模型具有较好的准确性和可行性。2.对比了四种荔枝多糖提取方式,包括热水浸提(LPH)、超高压(LPP)、超声波(LPS)和微波辅助法(LPM)的提取效果。结果表明:超高压提取效果最好,其得率和提取的多糖含量最高,分别为12.01%和79.72%。理化性质分析表明,四种方法提取的荔枝多糖均不含淀粉、还原糖、多酚,LPH和LPP含有糖醛酸,LPS,LPH和LPP吡喃糖环中的α-主导构型组成。LPH、LPP以及LPM由鼠李糖、岩藻糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,而LPS的组成与前三者均为不同。四种荔枝多糖的平均分子量也有一定的差异,其中LPH具有最高的平均分子量320213,其次为LPM为200198,最小的为LPS为79538。通过总还原力、DPPH和OH自由基清除活性比较,四种荔枝多糖的体外抗氧化活性大小顺序为:LPP>LPH>LPM>LPS。3.基于多糖纯化流程,利用DEAE-52纤维素凝胶柱和Sephadex G-100柱对超高压提取的水溶性荔枝多糖进行纯化,并获得了纯化的LPP1a和LPP2。通过纸层析、比旋光度法和Sephadex G-200葡聚糖凝胶色谱法对于纯化组分进行纯度鉴定,表明LPP1a和LPP2为均一性多糖。4.单糖组成分析表明LPP1a主要由鼠李糖、岩藻糖、甘露糖、半乳糖这4种单糖组成,而LPP2主要由鼠李糖、岩藻糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖组成。红外光谱分析结果表明LPP1a是一种含氨基的糖缀合物;LPP2中的葡萄糖残基为β型,存在质子化的羧基。三股螺旋结构测定表明LPP1a和LPP2均不含有三股螺旋结构。抗氧化性研究表明水溶性荔枝多糖LPP1a、LPP2具有一定的还原力,且对DPPH、OH自由基有一定的清除作用;同时,还原能力大小同多糖浓度具有一定的量效关系。5.甲基化研究表明:LPP1a主要由α-L-Rhap-(1→、(1→2)-β-D-Gal和→3,6)-β-D-Galp-(1→残基按21.0:12.2:9.5的摩尔比构成,此外还含末端甘露糖糖基和岩藻糖残基。LPP2所具有的糖苷键类型和摩尔比与LPP1a有所不同,LPP2主要由→3,6)-β-D-Galp-(1→、(1→2)-β-D-Gal和(1→4,6)-β-D-Glc残基构成,其摩尔比为20.8:15.6:15.3。
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