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研究背景和目的在我国,胃癌的发病率逐年升高,且病死率在所有肿瘤中居首位。从国内外近30年以来的随访数据可见,进展期胃癌的5年生存期仅为5%-17%。因此,如何提高胃癌的疗效、延长患者的生存期仍是目前临床上面临的一大挑战。近年随着对肿瘤分子生物学的深入研究,靶向治疗已成为中晚期胃癌的一种新型治疗手段。目前已有多个分子靶向药物应用于临床,它们主要是以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等为靶点,如贝伐珠单抗等,在临床研究中显示出一定的抗肿瘤作用。研究表明,作为Semaphorin、VEGF及其他因子共受体的神经纤毛蛋白-1(Neuropilin-1,NRP-1)在血管形成、发育和肿瘤的发展、转移的过程中起着重要作用,并与肿瘤的预后息息相关,因此它有可能成为肿瘤治疗的一个新靶点。目前国内外对NRP-1的研究也不少,但与胃癌相关的报道较少。本文旨在体内外检测本实验室制备的抗NRP-1单克隆抗体对胃癌细胞的生长的影响,为发展一种针对NRP-1靶标的新型抗肿瘤策略奠定基础。实验方法前期实验室已成功制备了纯度和浓度均较高NRP-1单克隆抗体(NRP-1m Ab)。利用Western blotting检测不同胃癌细胞株中NRP-1蛋白的表达,并选出高表达的一株细胞进行后期的实验;流式细胞术检测抗体亲和性、细胞免疫荧光定位检测NRP-1m Ab表达及其特异性;MTT比色法和集落形成实验检测NRP-1m Ab对胃癌细胞的生长增殖影响,光镜下观察NRP-1m Ab作用后胃癌细胞形态的改变;流式细胞术检测NRP-1m Ab诱发细胞的凋亡情况;Transwell检测NRP-1m Ab对胃癌细胞迁移、侵袭的影响。通过尾静脉注射NRP-1m Ab,体内研究其对胃癌裸鼠皮下移植瘤生长影响,根据瘤体大小得出抑瘤率,苏木精一伊红(HE)染色比较各组肿瘤组织的形态学变化;最后免疫组化分析癌组织内血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(microvessel density,MVD)及NRP-1的表达情况。实验结果结果证明,BGC-823、MKN-28、SGC-7901胃癌细胞株上NRP-1抗原表达均呈阳性且主要定位于细胞膜上,其中BGC-823表达更高;不同浓度的NRP-1m Ab均能抑制胃癌细胞BGC-823的生长增殖和细胞集落的形成,且NRP-1m Ab对胃癌细胞BGC-823的生长抑制作用呈剂量依赖性。而且,NRP-1m Ab可促进胃癌细胞BGC-823的凋亡、抑制胃癌细胞BGC-823的迁移及侵袭。体内实验结果表明NRP-1m Ab能抑制移植瘤的生长,给药组的细胞较对照组的凋亡更明显,NRP-1m Ab治疗组中VEGF、MVD、NRP-1表达都较对照组低。结论1、NRP-1m Ab能特异性的结合胃癌细胞上NRP-1蛋白,且胃癌细胞BGC-823上高表达NRP-1。2、NRP-1m Ab能显著抑制胃癌细胞BGC-823的生长并呈时效、量效关系。3、NRP-1m Ab能显著抑制胃癌细胞BGC-823的迁移、侵袭并呈量效关系。4、NRP-1mAb能抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长,且可能与下调VEGF表达、减低肿瘤组织微血管密度(MVD)有关。