大西洋与南海深海沉积物真菌多样性分析及极地产低温酶菌种的筛选

来源 :厦门大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yanjiawei2005
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本文通过传统的平板培养法和现代分子生物学方法PCR-RFLP,对10个大西洋不同深度的沉积物样品和8个南海冷泉区采集的一个push core的分层样品中真菌多样性进行分析,一定程度上揭示了这18个位点沉积物中真菌种类和数量。通过纯培养方法,从大西洋样品中我们共得到14个真菌纯培养物,从南海样品中我们共得到8个真菌纯培养物,它们多数归属于曲霉、青霉和酵母,这三类都是海洋常见的真菌类型,均为子囊菌;通过分子生物学方法,我们从大西洋样品中得到66个真菌OTU (operation taxonomic unit),其中属于子囊菌门和担子菌门的分别为61个和5个,通过分子生物学的方法得到的真菌OTU中,Penicillium citrinum、Penicillium chrysogenum,Aspergillus sp.MS-2011-F42TMS-2011都被分离得到。从南海样品中得到49个真菌OTU,其中属于子囊菌和担子菌的分别为47个和2个,通过分子生物学的方法得到的真菌OTU中,Aspergillus versicolor被分离得到。低温酶是在低温条件下具有较高催化效率的酶,因其在低温条件下催化效率高和对热敏感等特点,使其在工业应用和基础研究中都具有广泛的研究价值,低温酶有助于在保证催化效率的前提下降低反应温度和缩短反应时间,从而大幅度节约能源,低温酶的应用能够为人类社会的生产和生活提供很大的便利并且在定程度上缓解当今社会资源紧缺的问题。在10℃恒温培养条件下,从来白”雪龙号“第29次科学考察获得的南极沉积物样品中分离筛选到产蛋白酶细菌1株,编号为XP16-1,筛选到产蛋白酶真菌2株,编号分别为J18,P19-1,分别对其进行分子生物学鉴定,通过16srRNA及ITS rRNA扩增后进行同源性分析,比对后确定XP16-1属于交替假单胞菌(Pseudoalteromonas sp),J18属于木拉克酵母属(Mrakia sp), p19-1属于地丝霉属(Geomyces sp)。分离筛选出产脂肪酶细菌3株,编号分别为XZ5、XZ18、XZ20,筛选到产脂肪酶真菌1株,编号为XZ3,对其进行分子生物学鉴定,通过16s rRNA及ITS rRNA扩增后进行同源性分析,比对后确定XZ5属于假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas arctica)、XZ18属于芽孢杆菌属(Bacillus pumilus), XZ20属于Glaciecola sp、XZ3属于白冬孢酵母属(Leucosporidium sp)通过测定各酶的最适反应温度,获得产低温脂肪酶芽孢杆菌XZ18,又从盐度和pH两个条件对该菌产酶条件进行研究,最终确定了该脂肪酶最适反应温度为30℃,该菌最适产酶盐度5%、最适产酶pH为5.0180rpm/min摇培48h,最高产酶量为4.65U/m1.通过PCR扩增,获得了该脂肪酶全长序列,对该序列进行系统发育分析,发现该脂肪酶基因处于较独立的分支。
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