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单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种人畜共患的食源性致病菌。感染LM后能引起李斯特菌病,严重威胁人类身体健康和社会经济的发展。因此建立简单快速、灵敏度高和特异性强的检测方法对于该菌的防控具有重要意义。本文建立了免疫磁珠分离富集和荧光免疫层析试纸条相结合的方法,用于LM的快速检测。本研究以0.3%甲醛灭活的LM菌体作为免疫原制备兔多克隆抗体,加强免疫后抗血清效价可达1/1.02×106。SDS-PAGE凝胶电泳显示,Protein G柱亲和层析纯化比辛酸-硫酸铵沉淀法纯化制备的抗体纯度高。Western-blots结果显示,纯化多抗与LM菌体蛋白有三条特异性结合带。纯化多抗的特异性较好,纯化后效价为1/5.12×105,较纯化前抗体效价稍有降低。采用微米级和纳米级两种磁珠微球进行偶联,对免疫磁珠的偶联工艺条件进行了优化,评价了免疫磁珠的捕获效率及特异性,结果显示:活化剂为EDC/NHS,偶联体系为pH6.0的MES缓冲液,偶联温度37℃,偶联时间2h,抗体加入量为80μg/mg时,抗体蛋白的偶联率最高;免疫磁珠的最佳工作浓度为每毫升菌液加0.25mg,最佳孵育时间45min,纳米磁珠的捕获效率高于微米磁珠,免疫磁珠在杂菌中的捕获特异性较好。利用荧光免疫层析平台筛选出合适的配对抗体,对试纸条的工艺条件进行了优化,同时对试纸条的性能进行了测试,结果表明:试纸条最佳工艺为抗体标记浓度0.6mg/mL,检测线抗体浓度2mg/mL,膜干燥时间24h,胶乳稀释比例1:100,胶乳与菌液加样比例1:2,层析反应时间20min;试纸条纯培养物的检测限为4×105CFU/mL,平均回收率在96%-111%,板内板间变异系数均小于5%,试纸条的特异性及稳定性都较好,人工污染样本最低检测浓度仍为4×105CFU/mL。探讨了免疫磁珠不同的洗脱方式及粒径对洗脱效率的影响,同时对联合检测方法的灵敏度、特异性及人工污染样本进行评价,结果表明:最佳洗脱方式为PBS缓冲液70℃孵育10min,微米级磁珠的洗脱效率高于纳米级磁珠。纯培养样本100倍浓缩时,检测限为1×104CFU/mL,灵敏度提高了40倍,且联合检测方法的特异性较好。人工污染样本检测限为1×104CFU/mL,同纯培养物相比检测灵敏度并没有降低。