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单核细胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes，LM）是一种人畜共患的食源性致病菌。感染LM后能引起李斯特菌病，严重威胁人类身体健康和社会经济的发展。因此建立简单快速、灵敏度高和特异性强的检测方法对于该菌的防控具有重要意义。本文建立了免疫磁珠分离富集和荧光免疫层析试纸条相结合的方法，用于LM的快速检测。本研究以0.3%甲醛灭活的LM菌体作为免疫原制备兔多克隆抗体，加强免疫后抗血清效价可达1/1.02×106。SDS-PAGE凝胶电泳显示，Protein G柱亲和层析纯化比辛酸-硫酸铵沉淀法纯化制备的抗体纯度高。Western-blots结果显示，纯化多抗与LM菌体蛋白有三条特异性结合带。纯化多抗的特异性较好，纯化后效价为1/5.12×105，较纯化前抗体效价稍有降低。采用微米级和纳米级两种磁珠微球进行偶联，对免疫磁珠的偶联工艺条件进行了优化，评价了免疫磁珠的捕获效率及特异性，结果显示：活化剂为EDC/NHS，偶联体系为pH6.0的MES缓冲液，偶联温度37℃，偶联时间2h，抗体加入量为80μg/mg时，抗体蛋白的偶联率最高；免疫磁珠的最佳工作浓度为每毫升菌液加0.25mg，最佳孵育时间45min，纳米磁珠的捕获效率高于微米磁珠，免疫磁珠在杂菌中的捕获特异性较好。利用荧光免疫层析平台筛选出合适的配对抗体，对试纸条的工艺条件进行了优化，同时对试纸条的性能进行了测试，结果表明：试纸条最佳工艺为抗体标记浓度0.6mg/mL，检测线抗体浓度2mg/mL，膜干燥时间24h，胶乳稀释比例1:100，胶乳与菌液加样比例1:2，层析反应时间20min；试纸条纯培养物的检测限为4×105CFU/mL，平均回收率在96%-111%，板内板间变异系数均小于5%，试纸条的特异性及稳定性都较好，人工污染样本最低检测浓度仍为4×105CFU/mL。探讨了免疫磁珠不同的洗脱方式及粒径对洗脱效率的影响，同时对联合检测方法的灵敏度、特异性及人工污染样本进行评价，结果表明：最佳洗脱方式为PBS缓冲液70℃孵育10min，微米级磁珠的洗脱效率高于纳米级磁珠。纯培养样本100倍浓缩时，检测限为1×104CFU/mL，灵敏度提高了40倍，且联合检测方法的特异性较好。人工污染样本检测限为1×104CFU/mL，同纯培养物相比检测灵敏度并没有降低。