论文部分内容阅读
目的: 观察泛素蛋白酶体系统在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤中的作用，探讨其初步机制，并研究其与自噬及凋亡之间的关系。 方法: 1.运用不同浓度及时间点的ox-LDL处理HUVECs，采用免疫印迹技术检测泛素、及E1泛素激活酶、E2泛素结合酶、E3泛素连接酶的表达，观察ox-LDL对HUVECs泛素蛋白酶体水平的影响。2.在自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）及泛素蛋白酶体抑制剂MG-132的干预下，采用免疫印迹技术检测泛素、自噬标记蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达变化，观察在ox-LDL损伤HUVECs过程中泛素蛋白酶体途径与自噬之间的关系。3.运用不同浓度及时间点的ox-LDL处理HUVECs，采用免疫印迹技术检测溶酶体酶(cathepsin B、cathepsin D)的表达，观察ox-LDL对HUVECs溶酶体酶水平的影响。4.在泛素蛋白酶体抑制剂MG-132的干预下，采用免疫印迹技术检测溶酶体酶（cathepsin B、cathepsin D）的表达变化，进一步探讨ox-LDL损伤HUVECs过程中泛素蛋白酶体途径与自噬、凋亡之间的关系。 结果: 1.ox-LDL作用能上调HUVECs的泛素蛋白(Ubiquitin)表达，并呈剂量依赖性。免疫印迹技术结果显示，ox-LDL(100μg/ml)上调HUVECs中Ubiquitin表达的作用在12h和24h出现两个高峰。ox-LDL(100μg/ml)作用12h和24h也能显著上调HUVECs中E1、E2、E3酶的表达;2.3-MA能抑制ox-LDL引起的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达上调，同时对HUVECs Ubiquitin的表达无明显影响。MG-132在抑制ox-LDL上调Ubiquitin的同时能上调HUVECs LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达。3.ox-LDL作用12h能被HUVECs大量吞噬，并促进HUVECs增殖，该作用能被3-MA及MG-132明显抑制。4.ox-LDL(100μg/ml)作用能上调HUVECs中cathepsin B和cathepsin D表达，此作用在24小时达到高峰。5.MG-132可抑制ox-LDL介导的cathepsin B和cathepsin D的表达上调。 结论: ox-LDL能促进HUVECs增殖，并诱导其发生自噬和坏死。ox-LDL对HUVECs的损伤与其被细胞吞噬后的降解障碍有关，亦能诱导细胞凋亡，其可通过泛素蛋白酶体及自噬两条途径降解，泛素蛋白酶体为首要途径。泛素抑制剂MG-132能通过抑制ox-LDL诱导的细胞增殖，增强自噬，抑制凋亡，从而对ox-LDL所致的HUVECs损伤起保护作用。