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一定数量PAX(paired box,PAX)基因的表达与人类多种类型肿瘤的发生有着密切的关系。胚胎肌肉组织发生是由一个复杂的生肌调控网络调节的。生肌调节因子(myogenic regulatory factors,MRF)是肌肉基因专一的转录调节因子,是决定肌细胞分化的主导调控基因。转录调节因子基因PAX3是生肌调控网中居于上游的重要调节因子,是促使胚胎体节中皮肌节肌前体细胞移行到肢芽和维持肌分化方向所必需的。由染色体t(2;13)(q35;q14)易位而造成PAX3与另一个转录激活因子—叉头基因FKHR融合、形成的融合基因PAX3-FKHR。PAX3-FKHR可能与腺泡型横纹肌肉瘤的发生有着密切的关系。本实验以体外培养的人胚胎型横纹肌肉瘤RD细胞为对象,通过分别转染PAX3-FKHR和生肌调节因子MyoD、MRF4,观察PAX3-FKHR转染对横纹肌肉瘤细胞分化及MRF表达的影响。 方法:构建PAX3-FKHR的真核表达质粒;提取、纯化MyoD、MRF4、PAX3-FKHR质粒;利用脂质体方法将MyoD、MRF4、PAX3-FKHR质粒分别转入培养的人横纹肌肉瘤RD细胞,在RD细胞表达MyoD、MRF4后再将PAX3-FKHR质粒转入细胞;通过原位杂交法检测MyoD mRNA、MRF4 mRNA和RT-PCR法检测PAX3-FKHR mRNA,以及采用免疫组化法检测肌分化标志肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)和肌动蛋白α-actin的表达,并对MHC和α-actin的表达进行半定量图象分析,同时观察转染后细胞生长和形态的变化。 结果:1.MyoD、MRF4转染RD细胞有明显的MyoD、MRF4表达,细胞多变为长梭形,胞体变大,胞浆颗粒增多,细胞排列趋向整齐,生长变慢,MHC和α-actin表达较对照组有显著增加(P<0.01)。2.PAX3-FKHR转染细胞后,细胞多为多角形或小圆形,胞浆颗粒少,细胞排列紊乱,成堆、多层生长,生长快,几乎无MHC和。racllll的表达,与对照组比较相差不显著(Iyl.仍人3.在已表达Mp、W的n细胞中再转入IWX3 TyIR并表达该基因后,贿MyOD、WMA表达,细触为以多角形和小圆形为主,胞娜粒少,细腑列颖,鹏、多层生长,生长加快,MHC和。-actn a与 MyOD和 MRF l%#b1R比较有显著颖(Po*),与对照阻比较相差不显著(R4).05人 结论:1.表达生肌调节因子 MyOD、MRF可以触懒+横gb肉瘤细胞狐;2.表达PAX3IMllt融缝因对n细胞分化无明显影响,但可逆转*yOD、W的促分化作用:3.IWi IMIR未棚d帅。D、MRF的表达,朋转MyOD、W促RD细胞分化作用并4liimizrz:ll制MyD、W s④。