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猪轮状病毒感染在我国和世界各养猪国家普遍存在。快速准确地疾病监测是防治该病的前提条件,虽然轮状病毒检测有多种方法,但适用于现场对病原作出快速检测的方法还很有限,基于此本研究运用胶体金免疫层析技术,建立一种快速、简便、灵敏的检测A群猪轮状病毒的方法。将纯化的重组PRV VP6蛋白免疫兔子,制备得到抗VP6蛋白的多克隆抗血清;用抗PRV VP6蛋白杂交瘤细胞株C5D10注射BALB/C小鼠,制备得到抗PRV VP6蛋白腹水单抗。采取辛酸-硫酸铵盐析法和蛋白A(及G)亲和层析法对多克隆抗血清和腹水单抗进行两步纯化,纯化后的抗体用间接ELISA和SDS-PAGE检测其效价和提纯效果,SDS-PAGE结果显示提纯后的抗体没有杂带,主要为γ球蛋白,纯化后的单抗与多抗同VP6蛋白ELISA效价分别为10-5和1:1200;采用柠檬酸三钠还原法制备20nm的胶体金颗粒,胶体金标记纯化后的单抗,最佳标记量和最适pH值的测定结果分别为60μg/ml和PH8.5,低温超速离心法纯化标记好的金标单抗;纯化后的胶体金标记抗体作1:2.5稀释,吸附于玻璃纤维。用纯化后的多抗在硝酸纤维素膜(HF135)上划线作为检测线,最适划线浓度为0.8mg/ ml;用羊抗鼠IgG在硝酸纤维素膜(HF135)上划线作为质控线,最适划线浓度为0.5 mg/ml。检测试纸条对PRV培养液和未接种病毒的细胞对照液作为已知阳性和阴性进行实验,检测时间约10min,病毒培养液在检测线和质控线出现两条明显的红色条带,检验结果为阳性,而细胞对照液只在质控线上出现红色条带,在检测线未出现,检验结果呈阴性,与预期设计的结果相一致。对试纸条进行了敏感性、重复性、特异性实验。结果显示:试纸条检出病毒培养液(TCID50是0.1ml 10-6.25)最低限度为1:32稀释;不同批次试纸条重复检测,结果无明显差异;试纸条不与猪传染性胃肠炎病毒、流行性腹泻病毒相关腹泻病毒发生反应,表明所制备的试纸条具有一定的敏感性、重复性和特异性。本研究所建立的检测抗原的胶体金免疫层析试纸条,为猪轮状病毒病的快速诊断奠定了基础。