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目的:①建立一种简单,快速,成活率和纯度高的原代成骨细胞培养方法,以获得大量成骨细胞,为骨组织工程研究奠定基础。②探讨联合应用骨形态发生蛋白-2(BMP-2)和骨形态发生蛋白-7(BMP-7)对成骨细胞生物学活性的影响。方法:①无菌采取5日龄SD大鼠的颅盖骨,采用改良的二次酶消化法分离成骨细胞,通过倒置相差显微镜观察,并用碱性磷酸酶和矿化结节染色鉴定,利用微量滴定(MTT)法测定一个培养周期的成骨细胞活性分布。②培养的成骨细胞单独应用BMP-2和BMP-7以及联合应用BMP-2和BMP-7作用48h后,用MTT法检测成骨细胞增殖,同时测定成骨细胞裂解液中碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OCN)含量。结果:①倒置相差显微镜形态观察结果显示:未贴壁的细胞呈圆形,贴壁生长的细胞呈不规则梭形、三角形或多角形,单核,有1～3个核仁;碱性磷酸酶和钙化结节染色均呈阳性(阳性率≥98.06%);MTT法结合形态学观察结果显示,成骨细胞培养至第10d时活性最强。②单独应用BMP-2和BMP-7,联合应用BMP-2和BMP-7作用48h后,均能刺激大鼠乳鼠成骨细胞的增殖,增加成骨细胞ALP活性和OCN含量。联合应用BMP-2和BMP-7作用后,与对照组,单独应用BMP-2和BMP-7组比较,能明显增强成骨细胞生物学活性,统计学分析,有显著差异性,P<0.05。结论:①用改良的二次酶消化法能够在短时间内获得大量成骨细胞,且所培养的细胞具有典型成骨细胞形态和功能。②联合应用BMP-2和BMP-7能使成骨细胞生物学活性得到显著增强,以便进一步为临床上治疗骨缺损,骨折不愈合,促进骨折愈合和椎体融合提供理想的移植细胞。