番茄(Solanum lycopersicum)属于茄科番茄属,适应性强,易于栽培,产量高,品种多,具有较高的营养价值,在世界各地广泛种植。近年来番茄黄化曲叶病(Tomato yellow leaf curl disease,TYLCD)的发生制约着番茄生产的品质和产量。番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus TYLCV)属双生病毒,是导致世界各地番茄发病的重要病毒,对番茄的生产危害极大。TYLCV传播范围广、速度快,利用化学药剂、物理、生物等方式难以防治,而选育抗病品种能最经济有效的减轻该病害的发生。传统的番茄育种方式,存在育种周期长、耗费人力物力,不良连锁不易被打破等缺点。而分子标记辅助选择(marker-assisted selection,MAS)育种能够克服传统育种的缺陷,加快目标育种进程。目前已知抗TYLCV的基因有Ty-1、Ty-2、Ty-3、Ty-3a、Ty-4 ty-5、Ty-6,其中Ty-1和Ty-3基因已被克隆,抗病品种中的抗性基因主要以Ty-1、Ty-2.Ty--3和Ty-3a为主。ty-5基因是近年来新发现的抗TYLCV基因,含有该基因的材料对TYLCV具有很高的抗性,已初步将其定位在番茄4号染色体上,为主效QTL位点,可以解释46.6%的表型变异。因此,对ty-5基因进行精细定位并克隆,对番茄抗病品种的选育及其功能研究有重要的意义。本研究以抗TYLCV的番茄材料AVTO1227和感TYLCV的番茄材料moneymaker为亲本,构建分离世代,以F2群体为主要研究材料构建抗病池和感病池;利用BSA法与全基因组重测序技术相结合,将重测序结果和番茄基因组序列进行比较分析,将ty-5基因的候选区间初定位在4号染色体上约970kb的区间内,该区间含129个候选基因。在候选区域内设计开发ty-5基因的SNP和InDel连锁分子标记,筛选F2代重组单株,逐渐缩小候选基因的研究范围,完成对ty-5基因的精细定位。最终,将ty-5精细定位到ty5-25标记和ty5-29标记之间的14.5kb的区间内,该区间内只分布着一个基因pelota,确定该基因为ty-5的候选基因。对ty-5基因进行序列比较和表达分析,推测,ty-5基因的抗性是由于序列转录区域核苷酸差异所引起的。为了加快对ty-5基因的应用及多抗聚合育种体系的建立,本试验建立了ty-5和Ty-2基因的多重PCR体系。目前我国的番茄生产上还没有含ty-5基因的抗性品种,对该基因遗传连锁图谱的构建和精细定位,可选取连锁标记用于分子标记辅助育种的过程中,创制含有ty-5基因的番茄材料,丰富抗病种质材料,为该基因在品种中的应用奠定基础,也为此后的抗病机理研究提供理论依据。