目的:MicroRNAs(miRNAs)是一类长度为18-25 nt的非编码小RNA,它们可以通过与靶mRNA分子的特异性序列互补结合来调节基因的表达。miRNAs对细胞的生长、增殖、迁移、侵袭等都有重要的调节作用,异常的miRNAs表达与人类某些疾病包括肿瘤的发生发展都密切相关。胃癌(Gastric cancer,GC)是世界范围内发病率位列第四的癌症,其病死率位列第二。近年来有研究表明,在胃癌发生发展的过程中许多基因的表达及活性都发生了明显的改变,其中就包括miRNA。本实验室前期研究工作发现miR-320a促进肝癌细胞的凋亡,本文拟研究miR-320a在胃癌中的表达情况及其对胃癌细胞生物学行为的影响,确定其下游靶基因及该靶基因对胃癌细胞表型的影响,以深入探讨miR-320a的分子调控机制,从而为理解肿瘤的恶性特征提供新的实验依据,也可能为肿瘤治疗研究提供了新的靶标。方法:首先应用qRT-PCR技术检测miR-320a在人胃癌组织和癌旁正常组织中的表达差异,并检测了 miR-320a在两种胃癌细胞与正常胃粘膜上皮细胞的表达差异。然后在两种人胃癌细胞系MGC-803和BGC-823中,我们通过过表达或封闭miR-320a,利用MTT实验、Transwell迁移和侵袭实验检测了 miR-320a对胃癌细胞生长、迁移及侵袭能力的影响。之后利用生物信息学方法预测miR-320a的候选靶基因(USP14),并通过荧光报告载体实验、qRT-PCR和Western blot技术验证这一预测。此后通过过表达或敲降USP14,利用MTT实验、Transwell迁移和侵袭实验进一步研究USP14的功能。接着通过一系列表型的挽救实验进一步验证miR-320a对USP14的直接调控及是否通过该靶基因发挥作用。最后,过表达miR-320a或敲降USP14后,用流式细胞技术检测对细胞凋亡水平的影响,用Western blot检测对EMT相关功能蛋白的影响,从而深入探讨miR-320a对胃癌生长和转移的调控机制。结果:miR-320a在胃癌组织及胃癌细胞中表达明显下调,过表达miR-320a可以明显降低胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。生物信息学预测筛选USP14为miR-320a的候选靶基因。荧光报告载体实验、qRT-PCR实验及Western blot实验证实miR-320a能够通过靶定USP14的3’UTR区的特定位点,对其进行转录后负性调节。而干扰USP14后同样能够抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,这与过表达miR-320a的作用相一致。同时,外源性的升高细胞内USP14的水平,可以有效的挽救由过表达miR-320a引起的细胞表型的变化。此外,过表达miR-320a或敲降USP14后,用流式细胞技术检测发现细胞凋亡水平上升,用Western blot检测发现上皮细胞标志物E-Cadherin的水平明显上调,而间皮细胞标志物Vimentin及ICAM-1的表达明显下调。结论:在胃癌细胞中,miR-320a能够直接靶定USP14,并通过负性调控USP14的表达水平来抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,起到抑癌基因的作用。