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目前普遍的观点认为,心肌肌钙蛋白I(Cardiac troponin I,cTnI)是肌钙蛋白复合体(Troponin,Tn)中的抑制性亚基,是心肌纤维横桥ATP酶的抑制剂,并和Tn复合体中其他亚基一起在Ca2+的参与下调控心肌纤维的收缩与舒张。然而这些观点并不能完全解释为何cTnI基因不同位点的突变会导致两种表型迥异的遗传性心肌病限制性心肌病(Restrictive cardiomyopathy,RCM)及肥厚性心肌病(Hypertrophic cardiomyopathy,HCM)的发生。因此我们推测,cTnI可能仍存在尚未发现的生物功能。生物体各项生理活动的完成离不开蛋白质之间的相互作用,因此研究某一蛋白以其他蛋白之间的相互作用关系有助于更加深入地了解该蛋白的生物功能。本研究旨在于通过对cTnI相互作用的蛋白质的鉴定及生物信息学分析来预测cTnI可能存在对的生物功能及其在心脏疾病的发生发展过程中的作用。 第一部分小鼠心肌细胞中cTnI的相互作用蛋白的鉴定 目的: 分离并鉴定小鼠心肌细胞中与cTnI存在相互作用的蛋白质。 方法: 取普通C57新生小鼠心脏制备原代心肌细胞并提取心肌细胞全蛋白;行Co-IP实验沉淀出心肌细胞全蛋白中与cTnI存在相互作用的蛋白质;行SDS-PAGE凝胶电泳实验分离沉淀得的蛋白质样本;凝胶银染及质谱分析;将质谱分析结果与NCBI蛋白质数据库对比,获得蛋白基因名及氨基酸序列。 结果: 获得262种在生理状态下可能与cTnI存在相互作用的蛋白及其氨基酸序列。 结论: 在生理状态下cTnI可能与除心肌纤维蛋白外的多种功能蛋白存在相互作用。 第二部分cTnI相互作用蛋白质的理化性质及生物功能的生物信息学分析 目的: 分析cTnI相互作用蛋白质的理化性质与生物功能,以期进一步了解cTnI的生物功能及其在心脏疾病发生发展过程中可能扮演的角色。 方法: 使用蛋白质分析软件分析cTnI相互作用蛋白的理化性质、预测其是否存在跨膜区域及其可能的亚细胞定位;使用生物信息学软件对cTnI相互作用蛋白进行GO富集分析,KEGG Pathway富集分析及蛋白质相互作用网络分析。 结果: 获得262个可能与cTnI存在相互作用蛋白质的理化性质,包括平均分子量、等电点和平均疏水性,和其跨膜结构及亚细胞定位的预测分析;获得其可能参与的生物进程10条,KEGG信号通路33条及其蛋白质相互作用网络。 结论: cTnI可能通过其相互作用蛋白参与了L型钙离子通道,ATP代谢过程及PI3K-Atk信号通路的调节。 获得262个可能与cTnI存在相互作用蛋白质的理化性质,包括平均分子量、等电点和平均疏水性,和其跨膜结构及亚细胞定位的预测分析;获得其可能参与的生物进程10条,KEGG信号通路33条及其蛋白质相互作用网络。 结论: cTnI可能通过其相互作用蛋白参与了L型钙离子通道,ATP代谢过程及PI3K-Atk信号通路的调节。