鸡新城疫(Newcastle Disease)俗称亚洲鸡瘟，是由禽副粘病毒Ⅰ型引起的一种鸡的高度接触性传染病。由于非典型性新城疫不断出现和日渐流行，传统的诊断方法已经不能完全满足临床需要。本研究应用自备的针对新城疫病毒的单克隆抗体建立双抗夹心ELISA方法，可对新城疫做出快速准确的诊断。 本研究以新城疫鸡源强毒株ND35作为免疫原，四次免疫8周龄Balb/C小鼠，取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合，通过间接ELISA对杂交瘤细胞进行筛选，经多次亚克隆后，共获得5株针对新城疫病毒的特异性单抗，分别命名为：7G5，1C1，8G10，4A8，5F9。抗体亚类检测结果表明5株单克隆抗体亚类依次为IgG1，IgG1，IgG1，IgG2b，IgG1，所有McAb均为k链。其腹水的间接ELISA效价分别为1：16000，1：1000，1：2000，1：4000，1：8000。通过Western Blotting对7G5单抗针对病毒蛋白的鉴定，发现其在47.5-62kDa之间出现条带，预测7G5单抗是针对新城疫病毒F蛋白，为第二部分的实验奠定了基础。 采用纯化的新城疫强毒株ND35作为免疫原，灭活后以1：1加入弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂制成疫苗多次免疫成兔，获得抗ND35的高免血清。利用自制单抗7G5为检测抗体来建立检测新城疫病毒的双抗夹心ELISA方法。通过各个条件的优化，获得最佳工作浓度为：多抗1：800，单抗1：8000。酶标二抗的最适工作浓度为1：5000倍稀释。最佳封闭液为0.5％BSA，最佳包被液为50mmol/LpH9.6碳酸盐缓冲液。 用建立的双抗夹心ELISA方法对已知的EDS-76V、IBDV、IBV、MDV、APV、AIV(H5亚型)禽类病毒进行交叉反应性实验。结果表明：检测新城疫病毒的双抗夹心ELISA方法和其他禽类病毒均没有明显的交叉反应性，与阴性对照差异不明显，说明该方法对新城疫病毒具有高度特异性。 利用优化的ELISA反应条件对30份阴性尿囊液及40份健康鸡棉拭子进行检测，最终确定检测病毒尿囊液阴阳性判定标准为0.168，检测鸡棉拭子的阴阳性判定标准为0.2。 对双抗夹心ELISA方法的敏感性做了鉴定，结果表明，较HA敏感1倍以上。 对135份人工感染样品进行检测，并与鸡胚接种试验进行平行比较，发现两种方法的检测结果阳性符合率达到90.2％。