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随着塑料产品的广泛应用,邻苯二甲酸二丁酯(DBP)作为一种主要的增塑剂被广泛应用在工业,农业,食品中;同时DBP具有生殖毒性,遗传毒性等;因此带来的环境问题不容忽视。微生物能较早的预测环境污染变化,本文以Bacillus subtilis B7 (B. subtilis B7), Escherichia coli K12 (E. coli K12)以及从受DBP长期污染的土壤中筛选出来的DBP降解菌Novosphingobium aromaticivorans.DNB-S 1为研究对象,考察在Omg/kg DBP和40mg/kg DBP胁迫下微生物的生长状况,形态结构,膜质过氧化损伤以及抗氧化酶系统的变化,其中抗氧化酶系统的测定包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)。探讨DBP对典型微生物的毒理效应,阐明DBP降解菌DNB-S1对DBP的抗氧化机制;同时优化DNB-S1的培养条件确定最优培养基组成,为DBP降解菌DNB-S1的实际应用奠定基础。主要研究结果概括如下:(1)DBP对菌株B.subtilis B7和E.coil K12的氧化胁迫研究发现,相较于对照组,暴露在40mg/kg DBP条件下的细菌生长速率降低,而对菌株DNB-S1的生长速率无影响;通过透射电镜观察无DBP胁迫下,细胞内部的亚显微结构发现正常菌株细胞壁结构完整,细胞膜清晰可见,核糖体和核质体均匀分布在细胞内,而在DBP胁迫下菌株的细胞壁结构不完整,细胞膜褶皱变形,核糖体和核质体分布不均匀,而菌株DNB-S1的形态结构与对照组相比差异较小,说明40mg/kg的DBP对菌株B.subtilis B7和菌株E.coil K12的形态结构造成损伤;DBP胁迫下菌株B.subtilis B7和菌株E.col K12细胞中丙二醛(MDA)的含量是无DBP胁迫的2倍左右,说明40mg/kg DBP对菌株产生脂质过氧化损伤,菌株DNB-S1细胞中的MDA含量与对照组相比差异较小,说明菌株DNB-S1的耐受性较强。(2)研究发现菌株B.subtilis B7. E.coil K12和DNB-S1在DBP胁迫4-8 h时抗氧化酶活性显著增加,菌株B.subtilis B7和DNB-S1细胞中的SOD、CAT和POD活性变化明显,菌株E.coil K12中SOD和CAT活性变化明显,推测在防御DBP胁迫时不同菌株发挥防御作用的抗氧化酶不同;对三株菌株细胞内各部分的检测发现菌株不同部位的抗氧化酶活性变化不同,推测在DBP胁迫下菌株不同部位发挥的抗氧化作用不同。通过对比分析不同细菌响应DBP胁迫的抗氧化机制发现,菌株DNB-S1对DBP的耐受性较强,能够抵御环境中普遍存在的DBP污染。为使DBP降解菌DNB-S1能够被广泛应用实地修复,优化培养条件,研发出DNB-S1的廉价培养基,既能够降低生产成本,又能提高菌株产出率。(3)DBP降解菌DNB-S1的培养基优化经过单因素试验、Plackett-Burman试验以及中心组合试验,通过拟合的二次回归方程,最终优化出培养基配方为:玉米粉23.9 g、黄豆粉37.5 g、K2HPO4·3H2O 0.8 g、MgSO4·7H2O 0.4 g、NaCl 0.4 g、FeCl3·6H2O 0.0428 g、 CaCl2·2H2O 0.1 g、蒸馏水1000 ml,培养时间为24 h,优化后的培养基具有培养周期短,菌种产出高,价格低廉,具有较高的应用前景和良好的经济效益。