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目的:由日光中的紫外线(SUV)诱导的皮肤炎症和皮肤癌症极大地威胁着人类的健康。SUV主要通过激活p38和JNKs,引起皮肤炎症。其中,TOPK为p38和JNKs的上游激酶,在SUV诱导的皮肤炎症过程中扮演着重要角色。因此我们期望寻找TOPK特异性抑制剂,通过抑制TOPK蛋白激酶,进而缓解SUV诱导的皮肤炎症。方法:1、收集临床数据,用HE, IHC检测病人皮肤病理改变及TOPK, p-p38, p-JNKs的表达情况。2、在HaCaT和JB6细胞中,用Western blot检测SUV诱导的p-p38, p-JNKs和H2AX的表达情况。3、在HaCaT细胞系中,用慢病毒沉默TOPK,检测SUV对p-p38, p-JNKs和H2AX表达情况的影响。4、分子结合模型预测头孢拉定和TOPK的结合情况。5、体外结合实验检测头孢拉定和TOPK的结合情况。6、体外激酶实验检测头孢拉定对TOPK的抑制情况。7、在HaCaT和JB6细胞中,用MTS检测头孢拉定对细胞活性的影响;用Western blot检测头孢拉定对SUV诱导的TOPK下游信号通路的影响;同时ELISA检测炎症相关因子的变化。8、在Balb/c鼠中,用HE检测头孢拉定对SUV诱导的小鼠皮肤病理变化的影响;用IHC检测TOPK下游因子p-p38、p-JNKs、y-H2AX的表达情况;用ELISA检测相关炎症因子的变化。结果:1、临床数据表明,在日光性皮炎病人病灶组织中,TOPK, p-p38, p-JNKs高表达。2、在HaCaT和JB6细胞中,SUV以剂量和时间依赖的方式诱导p-p38和p-JNKs和γ-H2AX的表达。3、在沉默TOPK的HaCaT细胞中,沉默TOPK抑制SUV诱导的p-p38、 p-JNKs和Y-H2AX的表达。4、分子结合模型表明,头孢拉定可以直接和TOPK结合。5、体外结合实验进一步证实,头孢拉定可以结合TOPK。6、体外激酶实验表明,头孢拉定以浓度依赖的方式抑制TOPK的活性。7、在HaCaT和JB6细胞中,2 mM头孢拉定对二者的活性没有明显影响,头孢拉定以浓度和时间依赖的方式抑制SUV诱导的p-TOPK, p-p38, p-JNKs, p-ERK1/2, NF-KBp65, p-NF-KB p65和Y-H2AX的表达。ELISA结果表明,头孢拉定抑制SUV诱导的炎症因子TNF-a和IL6的分泌。8、动物试验表明,头孢拉定可以明显减轻SUV诱导的皮肤病理改变,抑制SUV诱导的p-p38, p-JNKs和Y-H2AX的表达,并且抑制SUV诱导的炎症因子TNF-a和IL6的分泌。结论:头孢拉定可以通过抑制TOPK的活性及其下游信号通路,抑制SUV诱导的皮肤炎症。