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目的:通过实验观察“热敷药”对硬皮病动物模型的羟脯氨酸和TNF-α含量的影响,为以后临床应用“热敷药”治疗硬皮病提供有力实验证据。
方法:首先把60只BALB/c小鼠,随机分为6组,分别为空白组10只、模型组10只、西药组10只、低浓度热敷药组10只、中浓度热敷药组10只、高浓度热敷药组10只。6组小鼠都剪去背部后中央区的,大约为1.5×1.5cm面积的被毛。除空白组外,其他5组都采用Yamamoto硬皮病的造模方法造模,其方法为用41/2针头注射器抽取浓度200μ g/ml的注射博莱霉素磷酸缓冲液每天一次,每次0.1ml皮下注射,连续用药5周后分为模型组、西药组、低浓度热敷药组、中浓度热敷药组、高浓度热敷药组。空白组只给注射磷酸缓冲液,其方法和时间与前5组相同。把每袋为300g重量的“热敷药”粉剂分别溶于3000、1500、760ml开水搅拌煮沸,制成浓度为10%、20%、40%糊剂,模拟临床用法直接外涂于低浓度热敷药组、中浓度热敷药组、高浓度热敷药组的背部皮损。模型组不用药,西药组用海普林软膏外涂,以上用药均为1次/日,连续1月后。前一天禁食不禁水,第二天把小鼠处死采用脊椎脱臼法,切去背部皮损固定于10%福尔马林液中。采用免疫组化技术检测各组小鼠皮肤组织羟脯氨酸含量和ELISA法检测血液中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,通过SPSS17分析结果。明确“热敷药”在治疗中的具体作用。
结果显示:羟脯氨酸含量经组与组之间两两比较分析,其余各组和空白组有差异,P<0.05;与高浓度无差异,P>0.05;模型组和西药组无差异,P>0.05,与高浓度组、中浓度、低浓度组有差异,P<0.05;西药组和高浓度组、低浓度组、中浓度有差异,P<0.05;高浓度、中浓度和低浓度组有差异,P<0.05。中浓度组和高浓度组有差异,P<0.05。肿瘤坏死因子含量经组与组之间两两比较分析,其余各组和空白组有差异,P<0.05;与高浓度无差异,P>0.05;模型组和高浓度组、中浓度组有差异,P<0.05与低浓度组、西药组无差异;P>0.05;;西药组和中浓度组、高浓度组有差异,P<0.05与低浓度组无差异;P>0.05;中浓度组、高浓度组和低浓度组有差异,P<0.05;高浓度组和中浓度组有差异,P<0.05。
结论:1.“热敷药”外用可降低硬皮病皮损中羟脯氨酸含量,且浓度越高效果越明显,2.TNF-α血清含量随药物浓度增加而逐渐减少。并且具有统计学意义。