结核分枝杆菌FadD8和人源CHMP2A的初步晶体学研究

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由于人口及其流动的增多、艾滋病与结核病的双重传播和耐药结核菌株的出现等,1990年以后全球结核病的发病率骤然回升,结核病已成为危害人类健康的全球性卫生问题。寻找新的药物靶标、设计新型抗结核药物已经成为当前控制结核病的重要策略之一。常选做药物靶点的关键酶有:与结核分枝杆菌细胞壁合成相关的酶、与抗耐药有关的酶以及与电子传递及氧化还原有关的酶等。该文着眼于结核分枝杆菌脂肪酸代谢中的关键酶-脂酰CoA合成酶FadD8,进行结构生物学研究。通过多种蛋白质分离纯化方法及其结晶实验,最终获得FadD8蛋白最高分辨率达3.1的晶体,但由于衍射质量的问题未能对衍射数据进行下一步的软件分析处理。需要进一步优化结晶条件以获得高衍射质量的晶体。同时,该文论述了FadD8蛋白与底物ATP和CoA的共结晶实验,得到各种晶形的复合物晶体,但未能优化出衍射质量较高的晶体。  另一方面,本文阐述了对ESCRT通路的研究情况。ESCRT通路是真核细胞内与逆转录病毒入侵、有丝分裂中膜的缢裂以及多泡体MVB的形成直接相关的蛋白复合体。本实验选择ESCRT-III中的CHMP2A蛋白进行结构生物学研究。实验中对单个蛋白及其与CHMP3和VPS4A蛋白复合物进行表达、纯化与结晶实验。最终获得表达量和纯度均较高的CHMP2A和VPS4A蛋白复合物,但未能获得较高衍射质量的晶体。虽然这些尝试都没能解析出CHMP2A蛋白的结构,但无疑对后人的纯化与结晶实验具有较大的借鉴意义。
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