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巨龙竹(Dendrocalamussinicus)是禾本科(Bambusoideae)竹亚科(Bambusoideae)牡竹属(Dendrocalamus)是世界上秆形最大的工业用材竹种,其秆高可达30m,直径20-30cm,具有重要的经济价值和广阔的开发前景。由于巨龙竹结实率低,在实际很难采到种子,因此采用传统的育苗法,育苗的成活率极低,发笋率也低,其分布区狭窄,种源稀少无法满足种苗的需求。本研究针对此种现状,对巨龙竹的胚胎发育过程进行研究,探讨巨龙竹结实率低的原因,并采用组织培养手段,对不同外植体进行愈伤组织诱导,为以后的遗传育种工作打下坚实的基础。
胚胎发育研究的主要研究结果如下:
(1)巨龙竹的雄蕊发育正常。从雄蕊原基开始形成到发育到成熟的花药,无论是纤维层还是绒毡层,均未见发育、结构异常,花药壁的结构发育是正常的。从孢原细胞的产生到花粉粒的形成,在各个发育阶段,也均未见到任何结构出现发育异常。花药成熟以后花粉散落出来,并且可以正常萌发,萌发速度快,萌发率也较高,30min后萌发率可达92.2%。
(2)巨龙竹的雌蕊发育正常。从雌蕊原基产生及生长,子房的生长,花柱的伸长。双层珠被的形成,倒生胚珠的产生,均发育正常。孢原细胞的形成,大孢子母细胞以及四分体的产生,到形成完整的胚囊结均,未见结构发育异常。巨龙竹的胚囊具有完整的结构,卵细胞、助细胞、中央细胞以及反足细胞的结构均正常。
(3)巨龙竹为雌雄异熟,授粉方式为异花授粉,大部分小穗同步开花。巨龙竹的受精正常,并且可以产生正常的胚、胚乳以及种子。在巨龙竹的子房中产生了正常的胚和胚乳。以后胚发育成正常的种子。因此可以认为,在巨龙竹的受精阶段并未出现发育异常。可见巨龙竹的结实率低亦并不由于巨龙竹的受精出现异常造成的。从卵细胞受精到发育成正常的种子,未见任何发育异常。
通过对巨龙竹的不同材料进行愈伤组织诱导,认为:
(1)在种胚、小穗和茎节诱导愈伤组织难易程度上,.由于种胚具有胚性组织,小穗具有发达的居间分生组织和胚性细胞,因此种胚和小穗较茎节更容易诱导愈伤组织,而种胚较小穗则更易一些,主要是由于小穗消毒不易。往往容易遭受到药害或者是被污染导致死亡。而成年竹诱导愈伤组织不容易主要是因为成年的竹节已经成熟,脱分化比较困难。种胚与小穗诱导的愈伤组织颜色是鲜嫩乳白色的,而竹节诱导的愈伤组织颜色发黄,易褐化死亡。种胚最佳的培养基为:MS+2,4一D3.O+KTl.O+蔗糖25。而小穗的最佳的培养基为:MS+2,4一D2.0+KT0.5+蔗糖25。
(2)巨龙竹成年竹的愈伤组织诱导比较困难。其试管引入、侧芽的萌发、愈伤组织的诱导的成功与否与外植体的采集部位、采集时间等相关。6月份之前实验效果不好,芽的萌发与愈伤组织的诱导均比较困难。