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犬乳腺肿瘤是犬最常发的肿瘤类型之一。乳腺肿瘤占所有犬肿瘤疾病的50%左右。犬作为与人类关系密切的伴侣动物,处于和人类相似的生活环境中,它们的自发性肿瘤是人类研究肿瘤的很好的的样本。所以对犬乳腺肿瘤进行深入研究,不仅有利于动物诊疗的进步,而且可以对人类乳腺癌研究提供新视角。环状RNA（circ RNAs）是一类共价闭合的环状内源性RNA分子。其功能涉及发育、损伤修复、代谢疾病、神经疾病、肿瘤疾病等各个方面。犬乳腺肿瘤中circ RNA功能还没有得到广泛深入的研究。本研究基于一些已发现存在于犬乳腺肿瘤细胞中的circ RNAs,开展circ＿TMTC1对肿瘤细胞的功能的影响进行了系统研究,为进一步阐明circ RNAs在肿瘤转移及迁徙作用及乳腺肿瘤的防控奠定基础。首先,本研究通过Sanger测序、琼脂糖凝胶电泳、放线菌素D处理实验、RNase R消化实验以及核质分离实验对circ＿TMTC1的环状结构进行了鉴定。通过RT-q PCR实验对组织和细胞的circ＿TMTC1的差异表达进行了分析。在对犬乳腺肿瘤细胞的circ＿TMTC1进行敲低和过表达后,通过CCK-8、Ed U增殖实验、克隆形成实验、迁移和侵袭实验对犬乳腺肿瘤细胞的特性改变进行分析。通过IC50的测定、Ed U增殖实验、克隆形成实验和细胞凋亡检测分析circ＿TMTC1敲低或过表达的肿瘤细胞对他莫昔芬耐药性的变化。同时通过Western blots实验对肿瘤细胞EMT相关蛋白和靶蛋白的表达水平进行检测。通过双荧光素酶实验对细胞miRNA与circ RNA和靶基因的调控作用进行了验证。最后通过裸鼠成瘤试验、HE染色、免疫组化分析对犬乳腺肿瘤体内肿瘤形成能力、血管形成能力和恶性程度进行分析。Sanger测序和琼脂糖凝胶电泳结果表明,circ＿TMTC1起源于犬第27号染色体上的TMTC1基因（XM＿005637011.4）,由其第2～5个外显子通过反向剪接得到的一个长度为636 nt的环状RNA。在放线菌素D处理细胞24 h内,线性TMTC1基因的细胞内丰度急剧下降,而circ＿TMTC1的丰度变化不大。在总RNA经RNase R处理30min后,TMTC1的含量显著降低,而circ＿TMTC1可以抵抗RNase R的剪切。核质分离实验结果表明circ＿TMTC1主要存在于犬乳腺肿瘤细胞的胞浆中。circ＿TMTC1在他莫昔芬耐药的犬乳腺肿瘤细胞中和犬乳腺肿瘤组织中高表达（p＜0.001）,且随着他莫昔芬的处理时间的增长而增加。在犬乳腺肿瘤细胞系中过表达和敲低circ＿TMTC1的实验中,circ＿TMTC1的敲低显著抑制了犬乳腺肿瘤细胞的增殖能力、侵袭能力和他莫昔芬耐药性。在5 d的培养过程中,敲低对照组的OD450值逐渐高于敲低组,且差异显著（p＜0.001）。Ed U阳性细胞比例从41.3%降至30%左右（p＜0.01）。克隆形成能力（p＜0.01）、迁移（p＜0.001）和侵袭（p＜0.001）能力也随着circ＿TMTC1的敲低而大幅降低。敲低circ＿TMTC1抑制了犬乳腺肿瘤细胞的EMT过程,western blots的结果表明,敲低circ＿TMTC1显著降低了间充质细胞分子标记（N-cadherin、Vimentin）的表达（p＜0.001）,增加了上皮细胞分子标记（E-cadherin、Cytokeratin8/18）的表达（p＜0.001）,而且EMT调节因子Snail、Slug、MMP2的表达也显著降低（p＜0.001）。在细胞耐药性方面,circ＿TMTC1的敲低使他莫昔芬耐药的犬乳腺肿瘤细胞系的IC50从12.5μM降至6μM左右（p＜0.001）。Ed U阳性细胞比例也大幅度降低,细胞克隆形成能力显著降低（p＜0.001）,细胞凋亡率显著上升（p＜0.001）。说明circ＿TMTC1敲低后犬乳腺肿瘤的他莫昔芬耐药能力显著降低。以上结果在circ＿TMTC1的过表达中得到了相反的结果。circ＿TMTC1的过表达显著提高了犬乳腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及他莫昔芬的耐药能力。研究发现,miR-195-5p受circ＿TMTC1的调控,在circ＿TMTC1敲低和过表达的肿瘤细胞中分别高表达和低表达。通过双荧光素酶试验确定了circ＿TMTC1和miR-195-5p的靶向调控作用。一方面,miR-195-5p的过表达抑制了犬乳腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,提高了肿瘤细胞对他莫昔芬的敏感性。在同时过表达circ＿TMTC1后,可以部分减轻miR-195-5p造成的抑制肿瘤进展的效果。另一方面,miR-195-5p的敲低促进了了犬乳腺肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,降低了肿瘤细胞对他莫昔芬的敏感性且可以通过敲低circ＿TMTC1部分减轻上述变化。CDC42作为miR-195-5p的靶基因,在蛋白和基因水平上都受到circ＿TMTC1和miR-195-5p调控作用的影响。细胞功能试验表明,CDC42的敲低显著降低了犬乳腺肿瘤细胞的增殖、迁移侵袭能力和他莫昔芬的耐药性。最后,裸鼠成瘤实验表明,circ＿TMTC1的敲除抑制了犬乳腺肿瘤细胞在裸鼠体内的生长、改变了肿瘤的恶性表现、抑制了肿瘤的血管生成。Ki-67的免疫组化结果表明敲低circ＿TMTC1对肿瘤的增殖有显著的抑制作用（p＜0.001）。同时,CDC42免疫组化也证明了circ＿TMTC1与CDC42正相关的变化趋势。本研究通过对环状RNA circ＿TMTC1在犬乳腺肿瘤功能的体内外研究,证明circ＿TMTC1通过对miR-195-5p/CDC42轴的调控作用促进了犬乳腺肿瘤的增殖、迁移、侵袭能力和他莫昔芬耐药性。研究结果为进一步阐明circ RNAs在肿瘤转移及迁移作用及乳腺肿瘤的防控奠定了一定的理论基础。