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目的:二甲双胍常用于治疗2型糖尿病,近年来发现二甲双胍有抑制恶性肿瘤生长的作用并且增强化疗药物的疗效。在妇科恶性肿瘤中,致死率最高的为卵巢癌,对于此疾病的预后而言,关键点在于摸索出预防以及逆转耐药的有效对策。有研究表明恶性肿瘤的形成和发展与IGF-1R密不可分,胰岛素样生长因子系统(IGF-I、IGF-1R和AKT)与卵巢癌耐药有关。因此我们实验目的通过研究二甲双胍对耐药卵巢癌细胞中IGF系统的作用来探讨二甲双胍对上皮性卵巢癌化疗的耐药机制,找寻一种新的卵巢癌的辅助治疗方法。方法:(1)采用原位杂交技术、免疫组化和免疫荧光技术检测上皮性卵巢癌组织、良性肿瘤组织,正常卵巢组织中MRP2蛋白和mRNA表达,分析其与卵巢癌生物学特征之间的关系;(2)CCK-8法检测细胞增殖能力并绘制生长曲线,计算耐药卵巢癌细胞铂类的耐药指数;(3)流式细胞仪、AnnexinV/PI双染法检测CP70细胞周期及凋亡;(4)蛋白质印迹法检测不同浓度二甲双胍作用CP70细胞后MRP2及相关信号通路IGF信号通路中IGF-1,IGF-1R,AKT蛋白的表达水平变化;(5)荧光定量PCR法检测不同浓度二甲双胍作用CP70细胞后,MRP2及IGF-1,IGF-1R,AKT,p-IGF1,p-IGF1R,p-AKT 基因表达的变化;(6)建立顺铂耐药人卵巢癌CP70细胞株和不耐药A2780细胞株皮下移植瘤模型分析二甲双胍对裸鼠移植瘤组织中MRP2表达的影响及其对肿瘤的抑制。结果:(1)MRP2蛋白表达在正常卵巢组织、良性卵巢组织和上皮性卵巢癌中的阳性表达率分别为0(0/5),20%(2/10)和58%(14/25),差异有统计学意义,P<0.05;MRP2基因表达在正常卵巢组织、良性卵巢组织以及上皮性卵巢癌中的阳性表达率分别为0(0/5),10%(1/10)和48%(12/25),差异有统计学意义,P<0.05。卵巢上皮癌组织中MRP2蛋白以及MRP2 mRNA的表达不受病人年龄、病理分期影响,差异无统计学意义(P>0.05),但其表达与病理类型、有无淋巴结转移有关(P<0.05)。(2)用不同浓度的二甲双胍作用于卵巢癌细胞株A2780和耐药细胞株CP70后,对顺铂的敏感性增加。CCK-8法检测二甲双胍处理CP70细胞24h后,对顺铂的耐药倍数明显下降,且呈浓度依赖性。(3)CP70细胞周期分布随着二甲双胍浓度升高而发生明显改变,表现为G0/G1期比例增多,10mM/ml与0.01mM/ml组相比差异有显著性(F=69.514,P<0.05),100mmol/L二甲双胍浓度的自然凋亡率与10mmol/L浓度比较差异有统计学意义(F=79.814,P<0.05)。(4)蛋白质印迹法检测二甲双胍处理CP70细胞48h后,发现IGF-1,IGF-1R,AKT的表达都随着二甲双胍浓度的增加呈现逐渐降低的趋势,p-IGF1,P-IGF1R,P-AKT降低趋势相比较于IGF-1,IGF-1R,AKT更明显,二者都有明显的浓度依赖性。各蛋白组与β-actin相对灰度比与0 mM/ml浓度二甲双胍比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中0 mM/ml二甲双胍+阻断剂LY294002组10 mM/ml联合应用对卵巢癌细胞CP70细胞的抑制作用最显著。(5)二甲双胍可以影响 MRP2 及 IGF-1,IGF-1R,AKT,p-IGF1,p-IGF1R,p-AKT基因的表达,并呈浓度依赖性,从而抑制CP70细胞的增殖活性,不同浓度的二甲双胍组与正常对照组表达差异有统计学意义(P<0.05)。(6)观察A2780组和CP70组裸鼠的肿瘤体积与生长情况发现,顺铂组+二甲双胍组的肿瘤体积明显小于对照组和单纯使用顺铂治疗组,A2780+顺铂+二甲双胍的抑瘤率为59.16%,CP70+顺铂+二甲双胍的抑瘤率则为79.03%,均明显高于单纯使用顺铂,差异有统计学意义(P<0.05)。(7)体内实验证明二甲双胍抑制MRP2蛋白的表达,且顺铂+二甲双胍两种药物联合使用较单独使用对A2780、CP70细胞具有更高的抑制率,两药表现出协同作用。结论:(1)MRP2蛋白在上皮性卵巢癌中有阳性表达,表达水平与卵巢癌类型和淋巴结转移有关。(2)一定浓度的二甲双胍可以增强顺铂对卵巢癌CP70细胞的敏感性。(3)二甲双胍通过抑制IGF信号通路IGF-1、IGF-1R和AKT受体的表达抑制MRP2蛋白抑制卵巢癌细胞对顺铂的耐药性。(4)体内实验证明二甲双胍通过抑制MRP2蛋白增强顺铂对卵巢癌A2780和CP70细胞的抑制作用,且顺铂+二甲双胍的联合用药对肿瘤的抑制效果更好。