论文部分内容阅读
褐腐病是目前引起樱桃等核果类腐烂最常见、危害最严重的病害之一。引起褐腐病的褐腐病菌其形态特征与培养性状在种内存在很大的变异性和可塑性,所以利用传统的培养方法很难进行准确、有效的鉴定,从而阻碍了对病害发生规律和防治的研究。同时目前用于褐腐病防治的化学药剂存在许多弊端,因此积极寻求一种安全、经济、高效的技术用于樱桃褐腐病的防治成为一个亟待解决的问题。本研究首先采用18SrDNA的特异性引物NS1和GCFung,对在果园、超市、早市等不同采样点收集提取的褐腐樱桃上的总DNA进行PCR扩增,再行DGGE分析PCR产物。电泳结果得到了5条特异性条带,经过测序、比对,鉴定为Ciboria batschiana、Monilinia laxa、Monilinia fructicola、Sclerotinia sclerotiorum、Sclerotinia trifoliorum,其中Monilinia fructicola为优势菌且为不同采样点的共有菌株。在分析褐腐樱桃菌群组成的基础上,以褐腐樱桃的主要致病菌——美澳型核果褐腐病菌Monilinia fructicola的全菌及细胞壁(根据粒径大小分为A、B、C3组)作为抗原免疫蛋鸡,制备了特异性IgY。特异性IgY经间接ELISA法检测,结果表明各组抗体均具有抗菌活性,与对照组相比差异显著(P<0.05),其中蛋白浓度为4 mg/mL的全菌组的抗体活性高于蛋白浓度为0.3 mg/mL的全菌组；细胞壁抗原C组获得的抗体活性高于全菌组；体外抑菌实验结果表明,抗体浓度在0-50 mg/mL范围内抑菌活性具有剂量依赖性；当特异性IgY浓度在25 mg/mL以上时显示出显著的抑菌效果(P<0.05)。樱桃的有伤接种抑菌实验结果表明,先施加25 mg/mL特异性IgY然后再施加菌片的实验组,可将发病时间推迟12h；而先施加菌片再施加25 mg/mL特异性IgY的实验组,可将发病时间推迟24h。检测多酚氧化酶(PPO)和过氧化物歧化酶(POD)的实验结果表明,施加特异性IgY可诱导樱桃果肉中PPO活性的升高,但对POD活性的诱导作用不明显。本研究对大连地区的褐腐樱桃菌群组成进行了分析,并制备了抗褐腐病菌Monilinia fructicola的特异性IgY,研究成果将为樱桃褐腐病的防治及采后储运和保鲜提供有力的实验依据。