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为定量测量个体生长和繁殖过程中所释放的几丁质酶,经过0.1mol/L PBS缓冲液(pH=7.4,含0.2mol/L NaCl)提取,35%-75%硫酸铵沉淀,DEAE Sephadex A-25阴离子交换柱层析和Sephadex G-150分子筛柱层析,从大型溞Daphnia magna体内提纯了N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)。被提纯的NAGase达到了电泳纯。以粗提物为起点,酶的纯化倍数和纯化回收率为20.09和25.2%,纯化产物(大约6.5mg)的比活力为2243380U/mg。酶分子中各亚基的分子量分别为128、99和71kD。酶促反应的米氏常数Km为0.300mmol/L,最大反应速度Vm为0.072μmol/mg/min;酶催化底物分解的最适pH为7.0,最适反应温度为45℃；酶在pH4.2-7.8的范围内活性处于高位；在不高于35℃的温度下处理30min,酶活性下降不明显。至于大型溞培养液中的游离态NAGase,其催化底物分解的最适pH为7.4,最适反应温度为40℃,该酶在pH4.6-7.8的范围内活性处于高位,在不高于40℃的温度下处理30min,酶活性下降不明显。这显示被提纯的酶和培养液中的酶在对温度和pH的反应方面具有相似性,它们可能属于相同分子型。用纯化的NAGase免疫BALB/c小鼠,得到了小鼠抗NAGase多克隆抗血清。在此基础上建立了用抗血清定量检测大型溞NAGase免疫含量(NAGase-IR)的间接非竞争ELISA方法。方法学研究表明所用抗原最适浓度为9.1ug/mL,抗血清最适稀释倍数为1：8000；用以测定NAGase-IR的标准曲线为：Y=1.650(1-e-0172x),相关系数r=0.9984,标准误差S=0.0255,灵敏度为2.12ng/mL;建立的ELISA方法在不同蛋白浓度的批内、批间和整体的变异系数均小于10%,回收率介于95.4-97.6%之间,变异系数在1.67-9.27%之间。以本实验获得的抗血清与包括大型溞在内的几种水生节肢动物所释放的游离态NAGase进行反应。测得的交叉反应率,对大型溞、蚊子、摇蚊、剑水蚤、棘爪低额溞、绿藻分别为：87.5%、7.75%、6.25%、72.5%、80%、0.25%。这预示所制得的抗血清在甲壳纲内部特异性不高而在甲壳纲和昆虫纲之间具有较强特异性。作为抗原,来自大型溞体内和来自包括大型溞在内的几种水生节肢动物所释放的游离态NAGase与兔抗人基因重组N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶多肽抗体的交叉反应率均比较低(0.25%-19.09%)。利用间接非竞争ELISA方法研究了亚致死剂量(0.02μg/L、0.12μg/L、0.81μg/L)的硫脲类杀虫剂丁醚脲对大型溞群体发育进程的影响,21d的试验结果表明：在所设置的试验浓度下,大型溞群体的NAGase释放量与对照相比有明显的下降,且下降率与酶活性基本一致。这说明NAGase-IR可以作为群体生物量的指示因子。