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急性髓系白血病(Acute myelogenous leukemia,AML)是我国最常见的恶性血液系统肿瘤。目前已有大量研究表明,白血病干细胞(1eukemia stem cells,LSC)的病态克隆是产生和维持白血病的根本。LSC处于G0期,不仅具有自我更新的能力,还能增殖分化成各个时期的白血病细胞。LSC对常规化疗药物无效,是白血病复发的根源。所以寻找到一种方法能较为特异性的清除LSC是治愈白血病及清除残留病变的关键,随着生命科学的日新月异,在LSC靶向清除领域有了许多新的进展。白血病干细胞表面高表达CD123(IL-3R的α链)而正常造血干细胞(Hematopoietic stem cell,HSC)不表达,所以CD123是目前公认的可以从正常HSC中识别LSC的一个标记。本课题也从这个角度入手,尝试探讨CD123作为靶点的急性髓性白血病靶向治疗的新型治疗策略。目的:利用常见的表达纯化复性方法,获得大量高纯度、高活性的重组免疫毒素IL3-PE38KDEL并对其物理学及免疫学性质进行鉴定。方法:利用PQE30-IL3-PE38KDEL/SG12009原核表达系统生产重组免疫毒素IL3-PE38KDEL,在提取包涵体后,将溶解度经镍离子亲和层析柱层析及分子筛技术得到纯度较高的免疫毒素复性纯化产物,再经盐酸胍梯度复性,最后用westen-blot、质谱、氨基端测序等先进技术进行对目的产物鉴定。结果:发酵后目的蛋白表达量占总菌体的17.56%,经镍离子柱层析纯化复性后的目的蛋白纯度达到95%以上,westen-blot、质谱、氨基测序结果均表明,纯化产物分子量为54.9KD且具有相应的免疫学活性,序列与预期序列完全一致。结论:纯化复性方法对重组免疫毒素IL3-PE38KDEL的生物性质及纯度有较大影响选择一种适当的纯化复性方法至关重要。该实验为后续的重组免疫毒素IL3-PE38KDEL的功能研究奠定了基础。