不同处理油松cDNa-SRAP PCR体系建立及基因表达差异分析

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qweasd123qweqwe
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究以河北省承德市平泉县不同林分油松林为研究对象,通过野外试验处理和室内分子实验分析,设置对照处理,每株10头油松毛虫(Dendrolimus tabulaeformis)取食处理,每株30头油松毛虫取食处理和剪叶处理(剪叶处理程度与30头油松毛虫取食处理相同),结合cDNA-SRAP的基因表达差异研究方法,初步研究了自然条件下不同林分油松在不同处理条件下的基因表达差异,分析产生差异的原因,以及差异表达基因的功能进行分析,为进一步确认油松在自然环境下林分类型和油松毛虫取食的共同作用下产生诱导抗性的结构机制研究提供基因层面的证据。主要研究结果如下:  (1)利用正交试验设计L16(45)对PCR反应体系的TaqDNA聚合酶、模板cDNA、引物、Mg2+、dNTP这五个因素在四个水平上进行优化。使用SPSS软件对PCR结果结合方差分析和直观分析。确定了可用于油松研究的cDNA-SRAP最优的扩增反应体系(20μL):Taq酶2.0U,CDNA模板用量80~120 ng,引物浓度0.4μmol/L,Mg2+浓度1.5 mmol/L,dNTP浓度0.2 mmol/L,2μL00×Taq Buffer,用ddH2O补足。反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性50 s,35℃退火50 s,72℃延伸1 min,5个循环;94℃变性50 s,将退火温度升为50℃退火50 s,72℃延伸0 min,35个循环;最后,72℃延伸10 min;4℃保存。  (2)利用优化后的cDNA-SRAP技术,对225对SRAP引物进行筛选,从中选取20对引物组合进行统计,共扩增的到油松基因表达差异条带256条,基因表达差异条带92条。纯林扩增出118条,其中包含差异表达片段45条;混交林扩增出138条,其中包含差异表达片段47条。10头油松毛虫取食处理共得到基因表达差异24条,30头油松毛虫取食处理共得到基因表达差异条带37条,剪叶处理共得到基因表达差异条带31条。结果显示,产生的基因表达类型主要是上调表达型和下调表达型;不同林分类型中的油松基因表达差异不明显;不同处理对油松的基因有着明显的诱导作用,并且诱导作用随着胁迫处理的强度增加而增强,增强的效果使得某些基因表达增强。机械损伤也可以诱导油松产生基因表达差异,但作用强度弱于相同强度的油松毛虫取食。  (3)对10个差异表达转录衍生片段进行了测序,根据其碱基序列在NCBI网站上进行了Blast-X的比对,其中四个片段找到了相应的同源蛋白。分别是TDF-1、TDF-2、TDF-4、TDF-8,长度分别为253 bp、221 bp、320 bp、259 bp。对应的同源蛋白分别为假定蛋白、纤维蛋白、醌氧化还原蛋白、泛素交联酶。  从研究结果可以得出初步结论,林分类型没有对油松基因表达产生诱导效应;而不同程度油松毛虫取食以及剪叶损伤均能使油松基因表达发生改变,不同处理对油松的基因有着明显的诱导作用,并且诱导作用随着胁迫处理的强度增加而增强。
其他文献
广西地处喀斯特区,脆弱的地质环境给区内农业生产带来不利影响。深入探究喀斯特区耕作处理对土壤结构的影响,开展土壤大孔隙流特征相关研究,为该地区进行合理作物种植和耕地水土保持具有重要作用。本文以广西喀斯特区甘蔗地为研究对象,通过野外染色示踪法、室内CT扫描成像法和数理统计分析法,对免耕和耕作处理下的甘蔗地土壤大孔隙流染色形态,大孔隙空间结构等特征及影响大孔隙流形成的主要因素进行分析研究,系统揭示不同耕
学位
  随着人们生活水平的不断提高,农产品质量安全越来越受到广泛关注,加强农产品质量安全监管也随之成为当务之急。本文通过分析凤县农产品质量安全监管工作,指出了当前工作中存
  本文针对县级农产品质量安全监管工作中存在的问题及面临的机遇和挑战,通过调查提出具体对应措施,确保农产品质量安全。
  本文论述了随着经济发展和社会进步,畜产品消费数量和品种不断丰富,畜产品质量安全问题逐步成为社会各界关注的热点问题,提出要保护消费者的健康,保证畜牧业的稳定健康发展,必
  提高农产品安全水平,对农产品安全生产进行有效监管是农业监管部门亟待解决的问题。本文分析了农产品安全监管的现状及存在的问题并提出了解决的对策及建议。
  本文针对目前安康市兽药经营人员素质低,养殖场不规范用药,经营企业(人员)对GSP认识不到位、监管执法层面体制不顺、思想认识淡薄等方面问题,提出要加大法律法规宣传力度、
流域梯级开发与河流生态环境之间的矛盾已成为目前流域治理中迫切需要解决的重大问题,为了实现人水和谐,保持河流健康,对梯级水库的生态环境累积影响进行深入系统的研究具有
  新组建的县区农业执法机构,如何依法开展农资市场监管,确保种子、农药、肥料和农产品质量安全工作是摆在基层农业执法机构的新课题。本文叙述了榆阳区农业行政综合执法大队
随着我国经济快速发展、城镇化和工业化不断提高,电力需求在不断增加。水电作为清洁可再生能源,在电力系统中的比重越来越大,水电的持续健康发展对调整能源结构、实现节能减
  农产品质量安全监管是对公民健康负责的具体体现,是实现社会经济和谐发展的现实要求。近年来,国内外频发的农产品质量安全事件,不仅影响了消费者的健康,也影响了农业的可持续