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目的:探讨模拟微重力对肺T淋巴细胞功能的影响及作用机制。研究模拟微重力条件下,T淋巴细胞功能异常及与此功能密切相关的蛋白激酶C(PKC)信号转导途径、Ras/MEK/ERK信号转导途径的变化机制;研究模拟微重力条件下,瘦素对T淋巴细胞功能的调节作用及两条转导途径变化机制。 方法:1.分离肺T淋巴细胞,利用的旋转式细胞组织培养系统(Rotary Cell Culture System, RCCS,即旋转生物反应器)模拟微重力条件,分别在普通细胞培养容器组和旋转生物反应器培养T淋巴细胞;2.普通细胞培养容器组设4组,① 对照组,② 刀豆素蛋白A(ConA)组,③ 瘦素组,④ ConA+瘦素组;旋转生物反应器设5组,① 对照组,② ConA组,③ 瘦素组,④ ConA+瘦素组,⑤ ConA+12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波酯(PMA)组;3.采用PepTag非放射性PKC检测试剂盒测定T淋巴细胞PKC活性;采用酶联免疫吸附技术(双抗体夹心ELISA法)测定T淋巴细胞的白介素-2(IL-2)生成;采用免疫组织化学染色观察T淋巴细胞表达NF-κB、c-fos;采用流式细胞技术,检测T淋巴细胞表面抗原CD25、CD71的表达;采四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定T淋巴细胞的增殖反应;蛋白印迹(Western blot)法检测T淋巴细胞磷酸化的ERK和总的ERK蛋白的表达。 结果:1.普通细胞培养容器组培养的T淋巴细胞,刀豆素蛋白A(ConA)组与对照组比较,T淋巴细胞PKC活性增强,IL-2生成增加,表面表达CD25、CD71分子的细胞增多,NF-κB、c-fos的免疫组化染色阳性细胞的百分比增加,磷酸化的ERK蛋白量增加,而总的ERK蛋白量的不变,T淋巴细胞的增殖反应增加(P<0.01);2.模拟微重力条件下,即旋转生物反应器培养的T淋巴细胞,与普通细胞培养容器培养的T淋巴细胞相比较,ConA刺激后,PKC活性减低,IL-2生成下降,表面表达CD25、CD71分子的细胞减少,NF-κB、c-fos免疫组化染色阳性细