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背景IL-22是IL-10家族中的成员之一,主要由TH1、TH17、TH22细胞产生。IL-22的靶细胞主要是消化道、皮肤、呼吸道的上皮细胞[1、2、13、15]。IL-22受体表达在这些器官的上皮细胞膜上,针对各种病原体产生固有免疫[3]。从而增强宿主粘膜防御,清除入侵病原体,促进损伤粘膜修复。目前的研究显示IL-22在对抗肠道和肺脏革兰阴性菌,增强宿主防御中发挥着重要作用,但IL-22及其受体的表达量随肺炎的转归,其变化仍不明确。本实验将主要探讨IL-22及其受体在肺炎的进展过程中的表达。第一部分:构建SD大鼠肺炎实验模型目的通过气管内注射肺炎克雷伯菌标准株建立SD大鼠肺炎实验模型,从而为研究IL-22及IL-10R2在肺炎中的表达创造平台。方法50只SPF级SD大鼠随机分为模型组和对照组,随机分为模型组(n=25)和对照组(n=25),每组分为5小组,模型组、对照组均为5只。SD大鼠经腹腔注射10%水合氯醛400mg/kg麻醉后固定,铺无菌洞巾。颈部消毒,备皮无菌操作,切开颈部皮肤,暴露气管经气管注入0.2mL细菌混悬液(浓度0.9×109 CFU/mL),对照组滴入等体积无菌生理盐水。接种后立即竖立大鼠使其保持直立20秒,保证菌液均匀分布于双肺。于注菌后4h、1d、2d、3d、4d分批麻醉处死实验动物。取每组大鼠肺分别进行肺组织匀浆菌落计数和病理学检查.根据细菌学和病理学指标对建立的肺炎模型进行评价。(1)病理学检查:取左下肺经10%甲醛固定,常规切片,HE染色,光镜下观察肺组织病理变化。(2)细菌学检查:每小组随机选三只大鼠取左上肺组织,称重,放入组织研磨器中,于4℃冰浴下制成肺组织匀浆,将匀浆倍比稀释至106,分别取各浓度的匀浆液0.02ml接种于血琼脂平板上,放人35℃孵箱中孵育24 h,选取菌落在30～300个之间的平板进行菌落计数。结果1.肺炎组大鼠于接种后出现活动度下降,聚集成团,拒绝进食,竖毛,对刺激反应差,而对照组则无。2.病理结果:肺炎组大鼠大体标本可见肺组织双侧多叶出现明显充血、出血及水肿,镜下见肺泡结构破坏,肺泡腔及间质显著的充血及水肿,显著的中性粒细胞浸润,以3d组尤为明显。3.组织匀浆菌落计数:肺炎组大鼠肺组织匀浆培养出的细菌由本院细菌室API细菌鉴定系统证实培养出的菌落为肺炎克雷伯菌标准株。肺炎组大鼠组织匀浆菌落计数4小时组最高,以后逐渐降低,第4天菌落计数已明显降低。第二部分:IL-22及其受体IL-10R2的测定,所测数据与肺组织菌落计数之间关系的研究目的测定肺炎组大鼠IL-22及IL-10R2在不同时间段的表达,探索其在肺炎组及对照组的变化规律,研究其不同时间段的表达与肺组织匀浆细菌菌落计数之间的相关关系。方法分别取肺炎组及对照组右上、中肺并用RNA保存液保存于-80℃用于实时荧光PCR检测,取下腔静脉血2ml,3000转/min,离心20分钟,留血清用于检测IL-22浓度。结果造模后肺炎组IL-10R2mRNA的表达量4h开始升高,于第3天达峰值,差异有统计学意义(P <0.01);肺炎组与对照组同时间点相比,P<0.05,肺炎组第3天组与其他时间组比较,P<0.05。而对照组之间第1天、第2天IL-10R2略有升高,与其它对照组相比P>0.05,考虑与气管损伤有关。外周血清中肺炎组与对照组IL-22同时间点相比肺炎组均低于对照组。肺炎组随时间的延长血清中IL-22的表达逐渐升高,肺炎组与对照组相比,P<0.05,肺炎组第3天、第4天与肺炎组第4h和第1天相比,P<0.05,肺炎组第4h组和第1天组与肺炎组第2天组相比,P>0.05,肺炎组第3、4天组和肺炎组第2天组相比,P>0.05。肺炎组同时间点外周血IL-22与肺组织匀浆菌落计数的相关分析R=-0.587,P=0.002。IL-10R2mRNA与肺组织匀浆菌落计数的相关分析R=-0.64,P=0.01。结论1、气管内滴注肺炎克雷伯菌菌液可成功复制大鼠克雷伯菌肺炎模型。2、IL-22及IL-10R2在大鼠肺炎组模型中高表达.3、IL-10R2mRNA的表达量4h开始升高,于第3天达高峰,与同时间点肺组织菌落计数负相关,是肺炎克雷伯杆菌肺炎的早期炎症因子。4、IL-22在肺炎组血清中4h最低,第2天开始升高;与同时间点肺组织匀浆菌落计数负相关。