肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor, TNF)相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand, TRAIL),是肿瘤坏死因子超家族的成员之一。死亡受体5(death receptor5, DR5)属于肿瘤坏死因子受体超家族(tumor necrosis factor receptor superfamily, TNFR)的成员,其胞质区部分含有死亡结构域(death domain,DD),广泛分布于各种肿瘤细胞和正常组织细胞的膜上。配体TRAIL与肿瘤细胞表面的DR5结合,可诱导大多数肿瘤凋亡,而对正常的组织几乎没有作用。TRAIL还可与传统的化疗、放疗协同作用,逆转多种肿瘤细胞对药物、放射线的耐受性,明显增加其凋亡率,因而TRAIL在肿瘤的治疗中具有良好的应用前景。已有的研究结果表明,缺少N端胞外氨基酸序列的TRAIL114-281截短蛋白仍能引起细胞凋亡,而在Hela和人神经母细胞瘤中存在TRAIL蛋白被截短的现象,TRAIL mRNA缺少编码氨基酸91-140的核苷酸序列,目前仍不清楚114-141氨基酸片段的缺失对TRAIL功能的影响作用,因此有必要开展进一步的研究。为了探究114-141肽段对TRAIL114-281功能的影响,本研究通过PCR扩增获得TRAIL141-281基因,进一步将其亚克隆到原核表达载体pET-30a中进行重组蛋白的表达。经lmM IPTG诱导表达的TRAIL141-281蛋白通过SDS-PAGE检测,重组蛋白分子量约为22KD与预期大小一致,表达后的蛋白同时以可溶性和包涵体形式存在,以可溶性为主。使用镍离子亲和层析的方法对可溶性的TRAIL141-281蛋白进行了纯化,纯化后蛋白纯度超过90%。通过MTT法检测了TRAIL141-281蛋白的活性,初步表明重组TRAIL141-281蛋白的肿瘤抑制活性已丧失。为探究TRAIL与死亡受体相互作用的机制,利用脂质体转染将质粒pCMV-AC-GFP-DR5转化U20S细胞,建立了能稳定表达DR5的U20S细胞株,为进一步探讨TRAIL与DR5受体的相互作用提供了细胞模型。总之,本研究为下一步研究TRAIL与死亡受体相互作用的机制以及开发新的抗肿瘤药物提供了理论和实践基础。