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目的通过观察高氏盆炎方三号方对慢性盆腔炎模型大鼠行为学、病理学、炎症相关因子及核因子-κB(NF-κB)的影响,评价高氏盆炎方三号方治疗慢性盆腔炎的疗效,探讨治疗慢性盆腔炎的作用机制并观察对生殖功能的影响。方法实验一:抗炎实验将60只昆明小雌鼠随机分为6组,每组10只,空白组、高氏盆炎方三号方高、中、低剂量组,蒲苓盆炎康颗粒组,人胎盘组织液组,给药7天,二甲苯试剂0.05ml/只致炎,取双侧耳片,计耳廓肿胀度和抑制率。实验二:药效学实验和生殖功能实验将119只12周龄SD雌鼠随机分为两大组,药效学实验组(以下简称药效组)和生殖功能实验组(以下简称生殖组),除空白组,其余大鼠均以机械损伤联合化学烧伤的方法造模(10天),药效组每组10只,生殖组每组7只,分别分为7组,空白组、模型组、高氏盆炎方三号方高、中、低剂量组,蒲苓盆炎康颗粒组,人胎盘组织液组,除人胎盘组织液组为肌注给药外,其余各组均为灌胃给药,日1次,给药20天。1)药效组:观察大鼠的行为学、子宫形态学、组织病理学变化,ELISA检测各组大鼠血清GMCSF、IL-4水平,免疫组化法和RT-PCR法检测子宫组织中NF-κB基因和蛋白的表达。2)生殖组:给药20天后,将生殖组大鼠按雌雄比7:2合笼,观察大鼠动情周期变化;记录孕鼠的一般情况;计算各组妊娠率、产仔数、平均产仔数、存活率。结果1抗炎实验结果二甲苯小鼠致炎后,与空白对照组相比,高氏盆炎方三号方高、中、低剂量组均可显著抑制小鼠耳肿胀度(P<0.05),减轻红肿等症状。2药效学实验和生殖功能实验结果1)药效组结果(1)大鼠行为学:空白组大鼠未见行为学异常,模型组出现精神萎靡,反应迟缓,毛色萎黄无光,脱毛,食量少,阴道分泌物增多,后期部分大鼠出现排便不畅,腹部胀大。经给药治疗后大鼠行为学逐渐好转,其中高氏盆炎方三号方高、中剂量组大鼠基本恢复正常。(2)组织形态学:(1)肉眼观察大鼠子宫组织形态:模型组大鼠子宫充血肿胀,管腔狭窄、变形,宫腔弹性差,与周围组织形成粘连或包裹较重,部分出现与肠管粘连,出现肠梗阻,双侧子宫较难分离;经给药治疗后高氏盆炎方三号方高、中、低剂量组不同程度改善。与模型组比较,给药组大鼠子粘连评分均明显降低(P<0.05);(2)大鼠子宫肿胀度:与空白组相比模型组子宫肿胀明显(P<0.05);与模型组比较,高氏盆炎方三号方高、中、低剂量组子宫肿胀度明显减轻(P<0.05)。(3)组织病理学:模型组大鼠子宫腔壁结构紊乱,腺体萎缩变形,可见炎细胞浸润,内膜充血水肿,变性坏死的上皮细胞,纤维增生。经给药治疗后,各给药组病理改变均有改善。(4)病理评分:与模型组比较,高氏盆炎方三号方高、中、低剂量组大鼠子宫组织病理评分均降低(P<0.05)。(3)ELISA法检测大鼠血清GM-CSF、IL-4水平:模型组大鼠大鼠血清GM-CSF水平升高,血清IL-4水平降低(P<0.05),与模型组相比,高氏盆炎方三号方高、中剂量组大鼠血清GM-CSF水平均明显降低,血清IL-4水平升高(P<0.05);与蒲苓盆炎康颗粒组及人胎盘组织液组相比,高氏盆炎方三号方高剂量组大鼠血清GM-CSF水平均明显降低,血清IL-4水平升高(P<0.05)。(4)免疫组化和RT-PCR检测大鼠子宫NF-κB蛋白和基因表达:模型组大鼠子宫NF-κB蛋白和基因表达明显升高(P<0.05),与模型组比较,高氏盆炎方三号方高、中、低剂量组大鼠子宫组织NF-κB蛋白和基因表达均明显降低(P<0.05);与蒲苓盆炎康颗粒组比较,高氏盆炎方三号方高剂量组NF-κB蛋白和基因表达明显降低(P<0.05)。2)生殖组实验结果(1)动情周期变化:空白组大鼠在实验过程中直至受孕,其动情周期基本规律。造模后模型组和给药组部分大鼠出现动情周期紊乱。给药期间,模型组动情周期紊乱大鼠数量增加,与模型组相比,高氏盆炎方三号方高、中剂量组改善明显,紊乱率与模型组比较差异显著有统计学意义(P<0.05)。(2)对孕鼠一般情况影响:模型组大鼠均未受孕,给药组孕鼠精神状态较好,活动较灵活,毛色较光泽,饮水量增多,摄食量及体质量增长较快;(3)对生殖功能影响:模型组妊娠率明显下降,经高氏盆炎方三号方治疗后总妊娠率显著上升,且大鼠受孕率、产仔数、平均产仔数及子鼠存活率明显上升,与模型组相比高氏盆炎方三号方高、中、低剂量组受孕率明显升高(P<0.05);高氏盆炎方三号方高、中剂量组平均产仔数增多(P<0.05)。结论1高氏盆炎方三号方能够抑制二甲苯致小鼠耳肿胀度,具有显著抗炎作用。2高氏盆炎方三号方能有效治疗慢性盆腔炎,其治疗疗效比较中药高剂量组>中药中剂量组>中药低剂量组;其中中药中剂量组与西药对照组人胎盘组织液组疗效相当,低剂量组与中成药对照组蒲苓盆炎康颗粒疗效相当。其发挥抗炎抗粘连作用机制可能与NF-κB信号通路干预有关,通过上调抗炎因子IL-4的水平,抑制NF-κB激活,下调炎症因子GM-CSF水平,控制盆腔炎症,防止粘连发生。3高氏盆炎方三号方可改善大鼠的生殖功能,通过治疗盆腔炎症,抑制盆腔炎症进一步进展,修复因炎症造成的盆腔生殖功能的损伤,提高慢性盆腔炎大鼠受孕率及妊娠率,高氏盆炎方三号方各剂量组疗效优于中成药对照组蒲苓盆炎康颗粒,中剂量组与西药对照组人胎盘组织液组疗效相当。图8幅;表17个;参105篇。