人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)cDNA的克隆和表达

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为研究人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在治疗神经系统变性疾病中的作用,我们克隆了bFGF的cDNA序列,在添加Kozak序列后, 构建了bFGF的真核表达载体并在猴肾成纤维细胞系COS7中进行体外表达.实验过程为首先培养脑胶质瘤细胞系BT325,提取总RNA,根据文献报道序列设计特异性引物,进行逆转录PCR获取目的cDNA片段并将其连入克隆栽体pGEM-3zf(+),经ABI PRISM 377测序仪测序后显示,目的片段长468bp,与文献报道一致.用所克隆片段构建真核表达载体pCI-bFGF,转染COS7,经免疫组化和Western 杂交检测,发现确有bFGF的表达.
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