中药注射剂是中医药现代化的重要创新,在临床上发挥着重要的作用,中药注射剂所具有的实用性和有效性带来了巨大的社会经济效益。但是随着中药注射剂在临床上应用的日益广泛,不良反应的报道也与日俱增,中药注射剂的安全性问题引起了人们的广泛关注。中药注射剂的成分复杂,制剂工艺各异,缺少完善的质量评价体系,这些都是引起中药注射剂安全性的因素。因此,建立中药注射剂中引起不良反应物质的检测方法,加强对中药注射剂制备工艺的控制,显得尤为重要。本文以清开灵注射液为研究载体,针对引起中药注射剂过敏反应的原因之一——中药注射剂中的大分子蛋白进行研究,利用分析领域广泛应用于蛋白研究和适宜应用于中药注射剂中大分子蛋白分析的分析手段对清开灵注射液中的大分子蛋白进行考察分析,并以黄芪注射液、生脉注射液、注射用炎琥宁为载体对检测方法进行了验证。本研究通过对清开灵注射液的几种中间体中大分子蛋白的考察,探究了清开灵注射液中大分子蛋白的来源,为清开灵注射液制备工艺的过程控制提供了参考,实验方法可以作为清开灵注射液质量再验证的参考方法。本研究首先采用考马斯亮蓝法和三氯乙酸沉淀结合双缩脲法对清开灵注射液中大分子蛋白的含量进行初步考察,以清开灵注射液、清开灵注射液中间体—超滤残液为研究对象,以黄芪注射液、黄芪注射液中间体、生脉注射液为验证研究载体,确定清开灵注射液中的大分子蛋白的含量的大致范围。同时,采用该法对黄芪注射液、黄芪注射液中间体、生脉注射液中蛋白质含量进行了考察。实验结果表明,清开灵注射液中确实存在一定量的大分子蛋白,且中间体中大分子蛋白含量高于成品。本实验中得到的大分子蛋白的含量的结果也为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法的样品上样量提供了参考依据。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对清开灵注射液、超滤残液、水解液浓缩液、水解液收醇后浓缩液、栀子提取液浓缩液、栀子提取液收醇后浓缩液、板蓝根煮提液浓缩液、板蓝根煮提液收醇后浓缩液等中间体中大分子蛋白的分子量范围进行了考察,结果表明清开灵注射液中间体中均存在着较大分子量的蛋白,而经过醇沉后,大分子蛋白的分子量大大减小。以板蓝根煮提液浓缩液与板蓝根煮提液收醇后浓缩液液为例,大分子蛋白的分子量从3-80KD减少到3-30KD。清开灵注射液成品中大分子蛋白分子量范围为3-17KD。采用所建方法对黄芪注射液、生脉注射液中大分子蛋白含量进行了检测,黄芪注射液成品中未检测到大分子蛋白,而黄芪注射液中间体中大分子蛋白分子量最大为58KD。生脉注射液中大分子蛋白分子量范围为17-175KD,集中在60-110K。证明了发生不良反应的几种中药注射剂中均有大分子蛋白存在,或是在制备过程中有大分子蛋白的存在。采用尺寸排阻色谱法(SEC)对清开灵注射液及中间体中的大分子蛋白分子量进行进一步考察,清开灵注射液、清开灵水解液浓缩液中均未检测到大分子蛋白峰。经计算,栀子水解浓缩液中检测到的大分子蛋白的分子量约为283KD,板蓝根煮提液浓缩液中检测到的大分子蛋白的分子量约为42KD。采用所建方法对黄芪注射液、生脉注射液、注射用炎琥宁中蛋白质的分子量进行了考察,黄芪注射液中间体中大分子蛋白的分子量约为64KD,生脉注射液中大分子蛋白的分子量约为29KD,注射用炎琥宁中大分子蛋白的分子量约为10KD。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与尺寸排阻色谱法对分子量的检测虽然具体数值上存在差异,但是总体趋势相同。以上研究表明,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳与尺寸排阻色谱法可用于清开灵注射剂中大分子蛋白分析,可以作为清开灵注射液质量控制的参考。采用质谱法(MS)对清开灵注射液及中间体的大分子蛋白进行初步的考察。将从SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中获得的蛋白胶点进行酶解,对其进行质谱分析。结果表明：四种样品中得到的一级肽段信息相似,在利用软件分析之前,初步推断其中可能存在相同的大分子蛋白。通过上述研究,建立了可用于清开灵注射液中大分子蛋白含量及分子量的检测方法。同时,采用不同方法对清开灵注射液及其中间体中的大分子蛋白进行了系统研究,初步阐明了其来源,为清开灵注射液生产过程的质量控制提供了参考。