猪伪狂犬病病毒gC基因的克隆及生物信息学分析

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本实验提取了四川农业大学动物生物技术中心保存的Fa株、疫苗株783株、Bartha株和SA215株,四川野毒株SN株、SS株、SQ株、SL株和SCZ株,以及由韶关学院英东生物工程学院娄高明教授惠赠的北京BJ株、广东DG株、湖北HS株共计12株猪伪狂犬病病毒株的DNA并作为模板,应用PCR技术分别扩增得到了12条伪狂犬病毒完整的gC基因的片段。回收PCR产物,成功连接转化到感受态细胞大肠杆菌DH5α中,并通过菌落PCR和酶切鉴定正确后,送生物公司进行测序。将所得12条序列连同GenBank中登录的6条gC基因全序列共18条基因序列,使用生物软件对gC基因核苷酸序列的同源性、突变区域的定位、遗传进化关系、酶切位点的差异、密码子偏爱性、氨基酸序列的同源性、蛋白质亲水性、抗原表位分析、二级结构和三级结构预测等生物信息学内容进行分析。结果表明:PRV-gC基因的开放阅读框的核苷酸长度在1437bp~1464bp之间,氨基酸长度在478~487个之间,核苷酸同源性在94.9%~100%之间,氨基酸的同源性在90.2%~100%之间;在核酸175~222位存在高变缺失区,其中共有8个碱基突变和21个碱基的插入或缺失;在遗传进化关系上,四川地区流行的毒株与日本、欧美毒株有较近的亲缘关系,而我国其它地区的毒株间的遗传相关性较高,但与日本、欧美洲毒株亲缘关系较远;在18条PRV-gC基因核苷酸序列中均没有发现HindⅢ酶切位点,同时Fa株、DG株、SA215株、BJ株、Min A株和Ea株也没有BamHⅠ位点,Yamagata S-81株则没有SalⅠ位点,其它酶切位点出现的次数和位置都有细小差异;而不同PRV毒株gC基因均对G、C有明显的偏爱性。在蛋白质疏水性、抗原表位和二、三级结构的预测方面,不同毒株间具有相似性,但仍表现出一定程度的差异。
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