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本文初步研究了温和压力(0.1~2.5Mpa,特指较低的高压)在发酵工业中应用的技术可行性。以酵母WR-5、Saf和梨头霉AS365为实验菌株,以A260、A280和电导率为实验观察指标,研究了温和压力处理对微生物细胞膜通透性的影响。通过美兰染色法观察了温和压力处理对上述两株酵母存活率的影响。通过DHA-TTC法研究了温和压力处理对梨头霉AS365生理活性的影响(DHA为脱氢酶活力)。本文从多个方面研究了温和压力对难溶底物RSA在水中溶解性的影响。最后,实验深入研究了温和压力处理对梨头霉转化RSA生成HC的影响。
1、温和压力能显著提高酵母WR-5、酵母Saf、梨头霉AS365的细胞膜通透性,压力越大、加压时间越长,细胞膜通透性越大,表现为菌悬液的电导率、A260、A280不断增大。但是压力大小和加压时间长短并不和电导率、A260、A280呈完全的线形关系。说明压力对细胞膜通透性的影响是多方面的、较为复杂的。通过扫描式电子显微镜观察发现温和压力对微生物细胞的形态有一定的影响,加压处理后的微生物细胞表面出现明显皱折和塌陷,失去了正常的光滑圆润形态。
2、温和压力处理对酵母菌的存活率几乎没有影响,温和压力处理后,酵母菌的存活率几乎为100﹪。只有个别处于发芽繁殖期的酵母细胞和芽体死亡。这说明出芽繁殖期的酵母细胞比较容易受压力的影响。
实验结果表明压力对梨头霉菌丝体生理活性的影响是复杂的,0.5MPa的压力有利于刺激梨头霉,引起其应激反应,从而提高其生理活性,表现为其脱氢酶比活力达到最大值。但是当压力继续上升时,梨头霉脱氢酶的相对活力开始不断下降,2.5MPa处理1小时后梨头霉脱氢酶的相对活力降低至65.6﹪。而0.5MPa处1小时后梨头霉脱氢酶的相对活力达到了最高值112.3﹪。加压时间对梨头霉生理活性也有一定的影响。在加压初期,0.5MPa的压力有利于提高梨头霉生理活性,表现为其脱氢酶比活力不断增大,但随着加压时间进一步延长,压力开始对梨头霉生理活性产生负面影响。
3、本文从几方面研究表明:加压处理能显著增加难溶物质RSA在水中的溶解性。从而有利于增加发酵过程中RSA的传质速率,提高梨头霉发酵过程和11β羟基化反应的效率。
4、研究发现对梨头霉转化RSA生成HC的发酵过程进行阶段性加压处理是完全可行的。压力值、加压发酵时间、加压阶段和加压气源都会对该发酵过程产生显著的影响。过高压力值(>1MPa)、过长加压发酵时间(>8小时)、非氧气气源(如氮气)都会对转化反应产生显著的负面影响。在发酵后期加压的效果要远好于在发酵前期加压的效果。氧载体的添加对该好氧发酵过程有明显的促进作用,表现在HC的转化率和产量都普遍得到大幅度的提高。最佳的加压发酵处理条件是:先常压转化32小时,再用高纯空气为介质0.5MPa加压发酵8小时(发酵液中添加氧载体),然后再常压转化8小时,该条件下HC转化率可比常压对照提高21.3﹪。实验还表明梨头霉脱氢酶比活力和HC转化率有一定的正相关性。但是两者不完全成线性关系。
5、通过扫描电子显微镜观察拍摄压力处理和常压条件下发酵液中梨头霉的形态发现,压力对梨头霉菌丝体的形态有明显影响,不同加压气源对梨头霉的菌丝体的形态也有明显影响。
研究发现合适的温和压力处理可以提高微生物细胞膜通透性、增加或保持微生物的生理活性、提高难溶底物的溶解性,所以温和压力完全可以应用于发酵工业中。